豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究.pdf

1、分類號華中農(nóng)業(yè)大學碩士學位論文豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究StudyonSecretoryProteinsofStrePtocoeeusSuisSerotyPe2atDifferentTemPerature研究生:謝春艷導師:金梅林指導小組:金梅林陳煥春郭愛珍銳斌周吳劉正飛曹勝波教授教授院士教授教授教授副教授副教授專業(yè):預防獸醫(yī)學獲得學位名稱:農(nóng)學碩士研究方向:病原微生物及蛋白質(zhì)組學獲得學位時間:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大

2、學動物醫(yī)學院二00八年六月豬鏈球菌2型不同溫度條件下分泌蛋白的差異研究2實驗材料..............................................................................................................……232.1菌株及培養(yǎng)基……，......................................................

3、..................................……232.2主要實驗儀器...............................................................................................……232.3主要化學試劑.................................................................

4、..............................……232.4主要溶液配方...............................................................................................……243方法...........................................................................

5、...........................................……263.1PCR鑒定菌株毒力因子..............................................................................……263.1.1引物的設(shè)計與合成................................................................

6、.................……263.1.2PCR反應程序.......................................................................................……273.2SC一21菌株的培養(yǎng)條件................................................................................…

7、…273.3分泌蛋白樣品的制備...................................................................................……273.4THB培養(yǎng)基蛋白樣品的制備..........................................................……，.....……273.5蛋白定量.........................

8、..............................................................................……283.5.1精確定量:QuantityKit定量..............................................................……283.5.2粗略定量:Bradfd法................................

9、.........................................……283.6IDSDS一PAGE電泳.，.............................................................……，...............……283.7雙向聚丙烯酞胺凝膠電泳(2D一隊GE)........……，........................……，..........……283

10、.7.11EF..........................................................................................................……283.7.2IPG膠條平衡.........................................................................................……

11、293.7.3灌制凝膠................................................................................................……303.7.4膠條的轉(zhuǎn)移............................................................................................……303.7

12、.5打開循環(huán)水浴........................................................................................……303.7.6參數(shù)設(shè)置................................................................................................……303.7.7凝膠染色(銀

13、染)................................................................................……303.8圖像掃描及分析...........................................................................................……313.9差異蛋白質(zhì)點的鑒定.................

14、..................................................................……313.9.1切取蛋白點............................................................................................……313.9.2膠內(nèi)酶解...................................

15、.............................................................……313.9.3LCESI一MSMS質(zhì)譜分析及數(shù)據(jù)庫搜索.............................................……犯3.10實時熒光定量PCR.....................................................................

16、...............……323.10.1基本原理.......................……，................................................................……323.10.2總RNA的提取....................................................................................

17、……333.10.3cDNA的合成....................……，............................................................……343.10.4引物的合成..........................................................................................……343.10.5實時熒光定