腫瘤相關糖抗原KH-1的酶法合成研究.pdf

1、腫瘤相關糖抗原(tumor-associated carbohydrate antigens，TACAs)是一種在腫瘤細胞表面過度表達的糖鏈結構，通常以糖脂、糖蛋白的形式存在。這些非正常的糖基化與腫瘤的轉移、信號傳導有著密切的聯(lián)系。將TACAs與載體蛋白結合用于刺激機體，就有可能引起免疫應答，產生特異性的針對腫瘤細胞的抗體。因此獲得結構確定、均一的糖抗原，對于研究其生物活性、研發(fā)抗腫瘤疫苗和利用糖芯片進行診斷分析，進而治療癌癥，有著重大

2、的意義。
　　在TACAs中，Lewis抗原占多數。例如Lewis x(Lex)，Lewisy(Ley)， sialylLewis x(SLex)， sialyl Lewis a(SLea)和KH-1等。KH-1抗原是一種主要過度表達在乳腺癌和前列腺癌細胞表面的腫瘤相關九糖抗原[Fucα(1→2)]Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ(1→3)Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAcβ(1→3)Gal

3、β(1→4)GlcβOCer。KH-1包含Ley，即[Fucα(1→2)]Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAc結構和Lex，即Galβ(1→4)[Fucα(1→3)]GlcNAc結構。KH-1最早是從人的結腸癌細胞中分離出來，進一步研究發(fā)現(xiàn)KH-1僅僅在腺癌細胞表面被發(fā)現(xiàn)，而從未在正常的結腸組織中發(fā)現(xiàn)，因此它是腺癌免疫療法的潛在靶點。然而，應用這類基于KH-1抗原的免疫方法，卻面臨著一大困難，即糖抗原的大量獲得、免疫學性

4、質的鑒定和結構表征是一項復雜和具有挑戰(zhàn)性的工作。由于糖抗原的微觀不均一性，從自然來源提取分離糖抗原是非常困難的。采用人工合成的方法能極大的提高效率，靈活的得到特定結構的寡糖。近十多年以來，有多個研究小組分別采取不同的策略，運用化學法合成了KH-1,并進行了活性研究。研究結果表明KH-1與KLH偶聯(lián)所制備的糖疫苗能引起強烈的免疫反應，有望發(fā)展成為新型糖疫苗。然而前人的合成工作都選擇了化學合成的方法，由于化學合成不可避免的保護與脫保護操作，

5、導致合成步驟繁瑣且總收率低，同時對操作者的要求也很高。
　　相較于化學合成，酶法合成由于酶的高效性、專一性等特點，表現(xiàn)出了其獨特的優(yōu)勢。因此我們選擇了酶法，應用一鍋多酶(One-pot-multienzyme，OPME)體系，分步高效的合成了KH-1。
　　本論文以3-疊氮基丙基乳糖苷為起始原料，首先應用一鍋多酶體系，四步反應合成出了六糖骨架，之后兩步巖藻糖化反應，總共六步得到了目的產物。在進行酶法反應時，以廉價的單糖開始，