水溶性不對稱吲哚菁染料的合成、光學性能及生物標示.pdf

1、目的:吲哚菁染料具有光譜范圍廣(550 nm-1200 nm)、熒光量子產(chǎn)率高和檢測靈敏度高等特點，現(xiàn)已被廣泛應用于熒光探針、蛋白質(zhì)標示、DNA測序和細胞染色等方面。我們設計在吲哚“N”位引入非離子型水溶性樹杈PEG醚鏈，得到擁有產(chǎn)率更高、水溶性更好、光學性質(zhì)更加優(yōu)良等特點的新型水溶性不對稱吲哚菁染料。
　　方法:吲哚菁染料一般通過三個步驟合成得到，首先:通過Fisher反應得到堿性雜環(huán);其次:堿性雜環(huán)與烷基化試劑反應得到季銨鹽;

2、最后:縮合劑與帶有活性甲基的季銨鹽反應得到目標產(chǎn)物?；撬峄诫隆妆交酋Ｂ群途廴叶嫉葹樵虾铣傻玫揭环N新型水溶性不對稱吲哚五甲川菁染料Cy5-671和一種新型水溶性不對稱吲哚三甲川菁染料Cy3-567。由磺酸基苯肼和對溴甲基苯甲酸等為原料合成得到一種吲哚五甲川菁染料Cy5-668。利用紫外可見分光光度計和熒光分光光度計測定了產(chǎn)物的光學性質(zhì);吲哚菁染料經(jīng)過琥珀酰亞胺酯活化后與牛血清白蛋白或羊抗小鼠IGg進行了標示實驗;同時把Cy5-

3、671和Cy5-668的性質(zhì)進行了對比。
　　結果:我們總共合成十余種中間產(chǎn)物，最終得到了三種水溶性不對稱吲哚菁染料，其結構都經(jīng)1HNMR和MS確認。Cy5-671的最大吸收波長為657 nm，消光系數(shù)為1.6105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長671 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.24; Cy5-668的最大吸收波長為650 nm，消光系數(shù)為1.4105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長668 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.10; Cy

4、3-567的最大吸收波長為559 nm，消光系數(shù)為0.8105/M-1cm-1，最大熒光發(fā)射波長567 nm，熒光量子產(chǎn)率為0.06; Cy5-671在水中的光穩(wěn)定明顯高于Cy5-668;Cy5-671標記牛血清白蛋白的D/P值1.96，Cy5-668標記牛血清白蛋白的D/P值1.57，Cy3-567標記牛血清白蛋白的D/P值1.59。
　　結論:新型水溶性不對稱吲哚五甲川吲哚菁染料Cy5-671在吲哚“N”位引入非離子型水溶性樹