聚乙二醇化南瓜蛋白的制備及生物學(xué)活性的初步研究.pdf

1、目的：研究單甲氧基聚乙二醇丁醛(mPEG-BAD，20KD)修飾南瓜蛋白(CUS)的最適反應(yīng)條件以及修飾產(chǎn)物的純化方法，以目標(biāo)修飾產(chǎn)物（單聚mP EG-C US-BA D）為研究對象，對其體內(nèi)體外抗腫瘤活性及免疫原性進(jìn)行初步研究，為研制和開發(fā)南瓜蛋白的新劑型提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：1、用SDS-PAGE分析不同反應(yīng)條件對修飾反應(yīng)產(chǎn)物的影響；用離子交換柱進(jìn)行分離純化。
　　2、用MTT法檢測目標(biāo)修飾產(chǎn)物單聚mPEG-C

2、US-BAD對體外培養(yǎng)的HL-60、PAN C-1腫瘤細(xì)胞的增殖影響。
　　3、應(yīng)用昆明小鼠H22腫瘤模型觀察目標(biāo)修飾產(chǎn)物單聚mPEG-CUS-BAD的體內(nèi)抗腫瘤活性。
　　4、應(yīng)用ELISA技術(shù)觀察目標(biāo)修飾產(chǎn)物的免疫原性變化。
　　結(jié)果：1、通過篩選，選定CUS與mPEG-BAD的摩爾比為1：5，CUS的濃度2mg/ml，反應(yīng)時(shí)間48 h，pH6.5的磷酸緩沖液為最佳修飾反應(yīng)條件。在此條件下，目標(biāo)產(chǎn)物單聚mPEG-C

3、US-BAD的總修飾率可達(dá)約65％，經(jīng)兩步離子交換柱的分離純化，目標(biāo)修飾產(chǎn)物的最終得率達(dá)到約40%。產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE鑒定，基本上只顯示一條帶，表觀分子量明顯增大，約70KDa左右，純度大于97%。
　　2、與末修飾的CUS相比，單聚mPEG-CUS-BAD體外抗腫瘤活性大幅度下降。
　　3、與末修飾的CUS相比，單聚mPEG-CUS-BAD體內(nèi)抗腫瘤作用增強(qiáng)。
　　4、免疫原性分析顯示：與C US相比，單聚mP