利用MicroBCA法對(duì)三種材料表面固定的Fn分子進(jìn)行定量表征研究.pdf

1、植入物的生物相容性是生物醫(yī)用材料需滿足的最基本要求。從材料表面與生物內(nèi)環(huán)境相互作用調(diào)控的角度，對(duì)生物材料進(jìn)行表面修飾改性是提高材料生物相容性、滿足臨床應(yīng)用要求的關(guān)鍵。表面生物化是近年研究及應(yīng)用最為廣泛的方法之一，此方法不會(huì)影響材料的本體性能，可基本保持所固定的生物分子的活性。對(duì)與蛋白質(zhì)相互作用的表面進(jìn)行活性及量化表征，可更深入地了解蛋白質(zhì)和表面之間的相互作用，以及生物材料表面修飾等研究。
　　 本文主要通過(guò)MicroBCA法對(duì)F

2、n蛋白修飾的石英玻璃、純鈦薄膜、氧化鈦薄膜表面進(jìn)行定量表征，并結(jié)合目前應(yīng)用廣泛的FTIR、XPS、QCM等手段對(duì)其進(jìn)行跟蹤分析。以期為探尋不同接枝形式對(duì)蛋白接枝量的變化情況，尋求最適接枝方式起一定的指導(dǎo)作用，服務(wù)于實(shí)際應(yīng)用領(lǐng)域。
　　 (1)對(duì)于穩(wěn)定性較好的石英玻璃樣品，經(jīng)過(guò)化學(xué)清洗、多聚賴氨酸化、共價(jià)固定Fn多步處理后，采用MicroBCA檢測(cè)手段檢測(cè)，結(jié)果顯示石英玻璃表面涂覆多聚賴氨酸后接枝Fn的固定量為308±14ng/c

3、m2。同時(shí)還使用XPS全譜及C/N/O高分辨、水接觸角、酸性橙Ⅱ等手段對(duì)每一階段處理樣品進(jìn)行了定性或定量表征，了解了各步處理樣品表面的特性變化情況。
　　 (2)通過(guò)非平衡磁控濺射在石英玻璃表面沉積制得了純鈦薄膜。經(jīng)過(guò)堿活化、多聚賴氨酸化或硅烷化兩種固定形式，將Fn分子共價(jià)固定在純鈦表面。采用MicroBCA法對(duì)石英基底純鈦薄膜表面的Fn蛋白進(jìn)行定量，結(jié)果顯示以多聚賴氨酸形式接枝Fn的固定量為311±16ng/cm2，以硅烷化形

4、式接枝的Fn蛋白分子在鈦薄膜表面的固定量約為767ng/cm2。此外還將目前應(yīng)用較為廣泛的QCM檢測(cè)與其作了比較，兩種手段得到的Fn的固定量極為接近，可以說(shuō)明所測(cè)得樣品表面固定的Fn的量具有一定準(zhǔn)確性。實(shí)驗(yàn)中還通過(guò)水接觸角、傅立葉變換紅外光譜、XPS等分析證實(shí)了各步處理的樣品表面的特性變化情況。
　　 (3)利用非平衡磁控濺射設(shè)備，在石英玻片表面沉積制得氧化鈦薄膜。MicroBCA法檢測(cè)到石英基底氧化鈦薄膜表面以多聚賴氨酸形式接

5、枝Fn的固定量為386±6ng/cm2。同樣還結(jié)合傅立葉變換紅外光譜、X射線光電子能譜、水接觸角及酸性橙反應(yīng)等檢測(cè)表征了各步處理后表面性質(zhì)和化學(xué)成分的變化，證實(shí)了經(jīng)過(guò)本文的特殊處理后，可以將Fn分子更有效地共價(jià)固定到氧化鈦表面。
　　 (4)MicroBCA檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明共價(jià)固定Fn的不同材料表面會(huì)對(duì)其固定的量產(chǎn)生一定的影響，同時(shí)本文研究表明不同形式的接枝蛋白手段也會(huì)影響蛋白的接枝量。
　　 (5)本文在不改變材料表面的性