南海微藻的分離、鑒定及脂肪酸特性分析.pdf

1、隨著全球經(jīng)濟的快速發(fā)展，能源危機和環(huán)境危機也日益嚴重。微藻光合效率高、生長速度快、含油量高，已被公認為生產(chǎn)生物柴油的優(yōu)質(zhì)原料。然而，微藻的生物多樣性高，目前已有3萬株微藻被報道，如何從這個龐大的體系中篩選出適合產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)生物柴油的優(yōu)質(zhì)藻種，成為進行其他研究方向的基礎。中國四季分布明顯，我們必須尋找適當?shù)脑宸N，來適應不同的生長溫度，以實現(xiàn)微藻生物柴油原料的穩(wěn)定供應。南海生物多樣性高，多為暖水種，從南海海域采集微藻樣品進行分離純化，以期得到

2、一株含脂量高，生長速度快，耐受高溫的能源微藻，從而實現(xiàn)微藻生產(chǎn)生物柴油的產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)。
　　1、通過微吸管分離法對南海的樣品進行分離純化，共得到純化微藻12株。對純種藻株進行擴大培養(yǎng)，用新型快速植物基因組DNA提取試劑盒提取總DNA，用PCR技術擴增其18S rDNA，對序列進行測序，在CNBI進行序列比對分析，從而實現(xiàn)分子生物學的鑒定，同時結(jié)合光學顯微鏡、掃描電鏡和透射電鏡進行形態(tài)學分析，鑒定出所分離12株藻株，通過分子生物學和形

3、態(tài)學鑒定相結(jié)合的方法，大大增加了微藻鑒定的準確性。
　　2、對南海中分離純化的12株微藻進行總脂含量、生物量及脂肪酸組成進行分析。由生長曲線可知，這12株微藻全部長勢良好。通過甲醇-氯仿(2∶1)重量法對12株微藻中的總脂含量進行測定，其中含油量最高的微藻是梅尼小環(huán)藻（Cyclotella meneghiniana），總脂含量為39.95％，生物量為2.8535g/L，最終獲得生物量最大的微藻為微擬球藻（Nannochlorops

4、is salina），總脂含量為23.46％，生物量為4.3969 g/L。兩株微藻生長速度快，含油量高，是生產(chǎn)微藻生物柴油的優(yōu)良藻種。將從微藻提取的粗油脂經(jīng)過甲酯化反應后，通過氣相色譜技術，對其脂肪酸組分進行分析，所有微藻內(nèi)長鏈（14C以上）脂肪酸占總脂含量均在80％以上。結(jié)果表明，不同門類的徽藻中脂肪酸組成差異較大。金藻中主要脂肪酸種類為:C18:1、C14:0、C18:3和C16:0，DHA含量為8.19％;綠藻中C16:0、C1

5、6:1、C18:1含量較高，其他種類脂肪酸分布較分散，含量較低;硅藻中C14:0、C16:0、C16:1、C22:4含量較高，脂肪酸種類比較集中，除繭形藻外都含少量DHA。
　　3、通過單因子實驗探討了溫度、光照、營養(yǎng)鹽濃度對梅尼小環(huán)藻（Cyclotellameneghiniana）生長及油脂積累的影響，同時建立了通過BODIPY染色快速測定微藻內(nèi)粗油脂含量的方法。由實驗可知，梅尼小環(huán)藻（在接種10d左右達到平臺期，生長周期較短，