磷脂脂肪酸(PLFA)鑒定系統(tǒng)的功能拓展研究.pdf

1、磷脂脂肪酸(Phospholipid fatty acids，PLFA)是活體生物細(xì)胞膜磷脂的重要成分，由于不同類群微生物能通過相應(yīng)生化途徑形成特定的PLFA，使部分PLFA總是出現(xiàn)在同一類群的微生物中。因此PLFA具有較高的結(jié)構(gòu)多樣性和生物學(xué)特異性，可作為區(qū)分活體微生物群落生物標(biāo)記的基礎(chǔ)，也成為微生物分類的主要依據(jù)。
　　本文以磷脂脂肪酸(PLFA)技術(shù)作為切入點(diǎn)，以Sherlock MIS系統(tǒng)的功能拓展和譜圖數(shù)據(jù)分析為主線，探

2、討了PLFA的提取方法、分析方法及數(shù)據(jù)處理模型，比較了土壤和凋落物中微生物群落結(jié)構(gòu)間的作用關(guān)系，得到以下結(jié)果:
　　(1)建立并優(yōu)化了超聲提取土壤中PLFA的方法，與傳統(tǒng)振蕩提取法對(duì)比，發(fā)現(xiàn)利用超聲提取可大幅提高PLFA方法的提取效率，解決了大批量樣品分析PLFA的前處理問題。
　　(2)選取超聲溫度、超聲時(shí)間、提取劑量作為PLFA提取的主要影響因素，以PLFA的提取率為響應(yīng)值，結(jié)合響應(yīng)面法進(jìn)一步優(yōu)化PLFA的提取工藝。

3、r>　　(3)采用四川茂縣森林土壤和凋落物為研究對(duì)象，以PLFA作為特定微生物指示劑進(jìn)行微生物群落的劃分，利用主成分分析檢測土壤和凋落物中微生物類群間的相互作用關(guān)系。結(jié)果表明土壤和凋落物中微生物群落的整體差異并不大，但好氧菌與革蘭氏陰性菌更偏愛土壤，而其他類群的微生物則更傾向于凋落物。同時(shí)利用主成分分析檢測各實(shí)驗(yàn)條件對(duì)微生物群落結(jié)構(gòu)的影響，結(jié)果表明:超聲對(duì)原生動(dòng)物、好氧菌等微生物類群的提取有一定影響，但相對(duì)于整個(gè)微生物群落結(jié)構(gòu)的影響不大

4、，其他實(shí)驗(yàn)條件對(duì)微生物菌群的影響較小。
　　(4)以一定濃度的C19做內(nèi)標(biāo)，進(jìn)樣量分別取60、100、120、200、240ul進(jìn)行分析測試，表明內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣量對(duì)磷脂脂肪酸微生物測定結(jié)果有直接影響;通過對(duì)未知樣品的評(píng)估，確定了內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣量的參考范圍，減少了內(nèi)標(biāo)進(jìn)樣量對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果帶來的誤差。
　　(5)比較了目前常用的兩種數(shù)據(jù)處理方法對(duì)數(shù)據(jù)處理結(jié)果的影響，得出了最佳處理方法后再結(jié)合儀器自身的特點(diǎn)對(duì)該處理方法進(jìn)行改進(jìn)，并在此基礎(chǔ)上依托P