青蒿素對(duì)支氣管哮喘患者外周血Th17-Treg細(xì)胞因子的影響.pdf

1、目的：
　　通過(guò)檢測(cè)青蒿素干預(yù)前后支氣管哮喘患者外周血中IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度變化，根據(jù)其對(duì)不同時(shí)期哮喘患者外周血中這些因子濃度變化的影響，探討青蒿素對(duì)支氣管哮喘發(fā)病機(jī)制及治療的影響。
　　方法：
　　1.隨機(jī)收集健康人20例作為健康對(duì)照組，以及緩解期和急性發(fā)作期的哮喘患者各20例作為實(shí)驗(yàn)組，抽取每個(gè)人的清晨空腹外周靜脈血各5ml分別放置于肝素抗凝管中；
　　2.然后用Ficoll密

2、度梯度離心法分離制備單個(gè)核細(xì)胞液(PBMCs)，并用RPMI-1640完全培養(yǎng)液調(diào)整PBMCs液密度為2×107個(gè)/ml；
　　3.將健康組、緩解期組和急性發(fā)作期組哮喘患者的PBMCs液分別加入到24孔培養(yǎng)板內(nèi),同一標(biāo)本的PBMCs液分別放于兩個(gè)孔內(nèi)，每孔加PBMCs液1ml；
　　4.健康組的兩個(gè)孔均加入RPMI-1640培完全養(yǎng)液10ul和細(xì)胞刺激劑2ul，而各放有緩解期組與急性發(fā)作期組患者PBMCs液的兩個(gè)孔中分別加入

3、RPMI-1640完全培養(yǎng)液10ul和細(xì)胞刺激劑2ul、青蒿素(0.16umol/ml)10ul和細(xì)胞刺激劑2ul；
　　5.然后將以上所有培養(yǎng)板放置于37℃、5％CO2孵箱中刺激培養(yǎng)24h；
　　6.收集培養(yǎng)板中所有的PBMCs液分別放置于標(biāo)記好的空管中，3000r/min，離心20 min，留取PBMCs培養(yǎng)液上清于1.5ml的EP管中,放置于-80℃的冰箱保存?zhèn)溆茫?br>　　7.最后解凍-80℃的冰箱保存?zhèn)溆玫腜BM

4、Cs培養(yǎng)液上清,嚴(yán)格按照酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)法(ELISA)試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作,檢測(cè)出所有標(biāo)本的OD值,然后用相應(yīng)的ELISA軟件計(jì)算出各組中炎癥因子IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度,并分析比較數(shù)據(jù)。
　　結(jié)果：
　　1.用1640干預(yù)時(shí)，Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-17、IL-25的濃度在緩解期組和急性發(fā)作期組較健康組增高(P<0.05)，而急性發(fā)作期增高更明顯(P<0.05)；Treg細(xì)胞分泌的細(xì)胞

5、因子IL-10、IL-35的濃度在緩解期組和急性發(fā)作期組較健康組則降低(P<0.05)，急性發(fā)作期降低程度更大(P<0.05)；
　　2.青蒿素干預(yù)以后，緩解期組與急性發(fā)作期組中Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-17、IL-25的濃度降低(P<0.05)，急性發(fā)作期組與緩解期組相比較降低更多(P<0.05)；而Treg細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-10、IL-35的濃度升高(P<0.05)，同樣青蒿素的干預(yù)對(duì)急性發(fā)作期各細(xì)胞因子濃度變化的

6、影響較緩解期更為顯著，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.青蒿素可以調(diào)節(jié)哮喘患者PBMCs上清液中Th17/Treg細(xì)胞因子的濃度變化,降低Th17細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-17、IL-25的濃度,升高Treg細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子IL-10、IL-35的濃度,即青蒿素可以顯著改善支氣管哮喘患者外周血中炎癥因子IL-10、IL-17、IL-25、IL-35的濃度指標(biāo)；
　　2.青蒿素治療支氣管哮喘的機(jī)制可