缺氧誘導(dǎo)因子-1α在大鼠血栓閉塞性脈管炎模型中的表達.pdf

1、目的：
　　 1.建立血栓閉塞性脈管炎的動物模型2.建立動物血清中和肌肉組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達的檢測方法3.研究動物血栓閉塞性脈管炎模型血清和肌肉組織中缺氧誘導(dǎo)因子-1α的表達規(guī)律，為血栓閉塞性脈管炎病因和發(fā)病機制的研究提供實驗依據(jù)，從而為本病的治療方法和預(yù)后檢測提供新的思路。
　　 方法：
　　 1．Wistar大鼠35只隨機分為假手術(shù)組，1天，3天，1周，2周，3周，4周造模組，每組5只，術(shù)前均留取血

2、清標本，通過向大鼠股動脈注射月桂酸鈉，制造大鼠血栓閉塞性脈管炎模型，按照造模時間分批處死，假手術(shù)組于4周時處死，處死前留取術(shù)后血清標本，并取左右后肢造模處周圍肌肉組織。
　　 2．ELISA 法檢測造模前后血清中HIF-1α水平，免疫組化法半定量檢測造模后健側(cè)與患側(cè)肌肉組織中HIF-1α的表達。
　　 3．統(tǒng)計學(xué)方法：結(jié)果均用表示，統(tǒng)計學(xué)方法采用方差分析，兩兩比較采用LSD法，所有結(jié)果均由SPSS13.0軟件處理得出。<

3、br>　　 結(jié)果：
　　 1．體征變化：各造模組大鼠均出現(xiàn)左后肢缺血表現(xiàn)，依造模時間增加而逐漸加重，1天組、3天組均有左后肢缺血、腫脹、足趾發(fā)黑表現(xiàn)、1周組缺血表現(xiàn)加重、壞死范圍擴大至踝部。2周組出現(xiàn)干性壞疽、壞死范圍至膝部，局部炎癥反應(yīng)明顯，3周、4周組有壞死肢體脫落表現(xiàn)嚴重者有肢體干性壞疽甚至肢體脫落。組織病理切片示：炎癥反應(yīng)明顯，炎癥細胞聚集，肌肉組織失去正常紋理結(jié)構(gòu)，2、3、4周組股動脈內(nèi)可見節(jié)段性閉塞，廣泛血管內(nèi)血栓

4、形成，并伴有大量新生毛細血管。大鼠體征變化及病理切片結(jié)果證實，大鼠血栓閉塞性脈管炎模型建立成功。
　　 2．血清檢測結(jié)果：所有造模組大鼠術(shù)后血清HIF-1α表達均高于術(shù)前，造模1天、3天組、1周組、2周組、3周組、4周組、術(shù)后血清HIF-1α表達水平分別與各組術(shù)前比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），假手術(shù)組造模前后HIF-1α血清表達水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，各造模組術(shù)后血清HIF-1α表達在1天組迅速升高，

5、3天時略降低，后逐漸下降，但均高于假手術(shù)組水平，其中1天與3天之間、1周與2周之間、3周與4周之間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，其余造模組間比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。
　　 3．免疫組化結(jié)果：HIF-1α蛋白在假手術(shù)組雙側(cè)及造模組健側(cè)肌肉中低表達，造模組患側(cè)肌肉組織中高表達，各造模組患側(cè)HIF-1α蛋白表達的平均灰度值較健側(cè)比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，其中1天、3天組平均灰度值最低，兩組間比較差

6、異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，較其他造模組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，1周、2周組表達水平組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，較其他造模組差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，3周、4周組組間比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，較其他造模組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1．采用股動脈注射月桂酸鈉法制作TAO大鼠模型，方法簡便，造模成功率高，可用于TAO的科學(xué)研究。