羊胎盤提取殘留物高質(zhì)化利用研究.pdf

1、羊胎盤含有多種生物活性物質(zhì)，具有抗氧化、降血糖、抗菌抗病毒和提高機體免疫力等多種生理功效。我國羊胎盤資源豐富，但是對羊胎盤的利用率不足3％，因此，以羊胎盤為原料進行綜合開發(fā)利用具有積極的現(xiàn)實意義和廣闊的市場前景。
　　本文以羊胎盤提取殘留物高質(zhì)化利用為目的，首先對提取水溶性物質(zhì)后的羊胎盤殘余物進行營養(yǎng)價值分析，然后采用產(chǎn)蛋白酶微生物黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌對其進行發(fā)酵酶解并對產(chǎn)物的生物活性進行研究，得到了抗氧化和

2、免疫活性肽的最佳制備工藝并對產(chǎn)物的穩(wěn)定性和各組分的含量與活性進行研究。
　　主要結(jié)果如下：
　?。?）羊胎盤提取水溶性物質(zhì)后的殘余物進行營養(yǎng)價值分析：羊胎盤提取殘余物是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白，其蛋白質(zhì)功效比（PER值）為1.27，干基總蛋白含量為97.67%，其中氨基酸含量依次為：谷氨酸（10.24%）、甘氨酸（9.51%）、天門冬氨酸（6.56%）、精氨酸（5.65%）、亮氨酸（5.46%）、脯氨酸（5.41%）。氨基酸組成合理，

3、其第一限制性氨基酸為異亮氨酸和纈氨酸，兩者的氨基酸評分均為0.71。
　　（2）采用4種產(chǎn)蛋白酶微生物發(fā)酵羊胎盤提取殘余物制備具有抗氧化和免疫增殖活性的酶解產(chǎn)物。結(jié)果表明，四種微生物在各自適宜的發(fā)酵溫度和發(fā)酵pH條件下以黑曲霉的多肽產(chǎn)率29.67%最多，依次是枯草芽孢桿菌27.58%，地衣芽孢桿菌26.04%，米曲霉24.3%；考察產(chǎn)物的生物活性，其中以黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化活性最高，枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物的免疫細(xì)胞增殖活性最高。<

4、br>　?。?）黑曲霉發(fā)酵酶解羊胎盤提取殘留物制備抗氧化肽的最優(yōu)工藝條件為：接種量5%、發(fā)酵溫度30℃、料液pH5.6、碳源2.8%、發(fā)酵時間76.4h，所得的發(fā)酵液DPPH·清除率83.78%，多肽得率為30.90%；枯草芽孢桿菌發(fā)酵羊胎盤提取殘留物制備免疫活性肽的最優(yōu)工藝即料液發(fā)酵溫度37℃、pH5.4、碳源1.7%、發(fā)酵時間43.5 h，進行驗證試驗，測得酶解產(chǎn)物的刺激指數(shù)達到了24.38%，多肽得率27.89%。
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5、）研究發(fā)酵產(chǎn)物多肽的活性和體外的穩(wěn)定性，分別研究了產(chǎn)物的量效關(guān)系，pH值的影響，干燥方式、體外模擬消化?？寡趸牡淖杂苫宄孰S著濃度的升高逐漸增大，相同濃度下對自由基的清除能力要稍高于（谷胱甘肽）GSH的清除能力。免疫活性肽蛋白濃度在6.25-200μg/mL范圍內(nèi)對小鼠脾臟淋巴細(xì)胞具有明顯的增殖作用，在低于100μg/mL濃度時，隨著發(fā)酵液蛋白濃度的增加，刺激指數(shù)隨之增加，在濃度100μg/mL濃度時淋巴細(xì)胞的增殖率達到23.25%

6、。
　　抗氧化肽在pH5-8范圍內(nèi)，活性較穩(wěn)定，過酸或者過堿的環(huán)境中產(chǎn)物活性下降；干燥方法對產(chǎn)物的活性沒有產(chǎn)生太大影響，黑曲霉酶解產(chǎn)物的活性保持分別為97.6%和91.7%，對枯草芽孢桿菌酶解產(chǎn)物免疫保持90%以上。
　　模擬胃液、腸液中，發(fā)酵酶解產(chǎn)物的抗氧化活性保持率優(yōu)于免疫活性；當(dāng)胃液消化150 min時，產(chǎn)物對DPPH·清除率為50.88%，對·OH清除率為50.39%，其活性保持率分別為64.45%和58.46%；當(dāng)

7、腸液消化300 min時，其清除率保持分別為53.87%和63.18%，活性保持率分別為68.28%和73.13%，模擬胃液和腸液消化中免疫活性保持活性保持了44.61%和52.89%。
　　（5）以抗氧化性和體外免疫性為考察指標(biāo)，對產(chǎn)物各超濾組分的體外生物活性進行了分析探究。結(jié)果表明，具有較高抗氧化能力的組分YT-Ⅰ（＜3 KDa）、YT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占黑曲霉發(fā)酵酶解蛋白總量的61.4%超過50%，可見分子量少

8、于10 kDa的低分子蛋白組分對羊胎盤提取殘余物的抗氧化活性起著主要的貢獻，多肽含量分布滿足函數(shù)關(guān)系方程的曲線y=0.0006X2-0.0932X+3.1345；
　　枯草芽孢桿菌的發(fā)酵酶解組分中MT-Ⅰ（＜3 KDa）、MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占總量的85%，MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）對酶解產(chǎn)物的免疫增殖能力起到重要作用，MT-Ⅰ（＜3 KDa）具有較高的抗氧化活性，MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）與M