羊胎盤中SOD提取條件及小分子肽的分離純化研究.pdf

1、目的:
　　 胎盤(Placenta)又名“紫河車”為常用中藥，民間常將其煮爛食之。傳統(tǒng)中醫(yī)理論認(rèn)為胎盤性甘、咸、歸肺、肝、腎經(jīng)，功能為補(bǔ)氣、養(yǎng)血、益精，可用作滋補(bǔ)、養(yǎng)顏、強(qiáng)壯之藥。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究證明:胎盤除含有多種免疫球蛋白、活性肽之外，還含有干擾素、激素、磷脂和多種多糖等。從八十年代開始，我國(guó)許多學(xué)者便開始從健康產(chǎn)婦的胎盤中提取一種小分子活性物質(zhì)即胎盤活性因子或稱胎盤肽，經(jīng)研究證明胎盤肽對(duì)機(jī)體有增強(qiáng)抵抗力和免疫力的作用。研究家

2、畜胎盤肽的主要目的是將家畜胎盤中豐富的生物活性肽傳遞給動(dòng)物或人，以增強(qiáng)動(dòng)物或人體的生物功能，從而探索出一種充分利用動(dòng)物胎盤的新型免疫調(diào)節(jié)劑。本實(shí)驗(yàn)從羊胎盤中分離SOD及小分子肽，為以后的新型藥品研發(fā)奠定了一定的基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 自然界真核生物中SOD絕大部分為Cu-Zn SOD，其分子量為32KDa左右，故本實(shí)驗(yàn)利用超濾方法，將羊胎盤截留為30KDa-100KDa分子量片段，首先將30KDa-100KDa的分子

3、片段通過(guò)改變溫度、孵育時(shí)間和Cu2+-Zn2+濃度來(lái)檢測(cè)SOD活性的變化，從而選擇比較好的條件來(lái)提取羊胎盤中的SOD。本實(shí)驗(yàn)還將上述30KDa-100KDa分子量片段利用層析純化和雙酶水解的方法得到我們所需要的目的片段小分子肽，并對(duì)這兩部分小分子肽進(jìn)行測(cè)序。
　　 結(jié)果:
　　 利用超濾方法截留羊胎盤提取液30KDa-100KDa，通過(guò)改變溫度、孵育時(shí)間、Cu2+-Zn2+濃度選取最適條件來(lái)提取羊胎盤SOD。還利用層析純

4、化的方法獲得了兩段小分子肽片段，并對(duì)其成分進(jìn)行鑒定。經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，溫度為68℃、孵育時(shí)間為10min及Cu2+-Zn2+在濃度為0.0002％時(shí)，SOD同工酶譜顯示此段截留的羊胎盤樣品具有三種同工酶，分別為55KDa、32KDa、17KDa，其中55KDa SOD活性最高，并得到其粗提物為3g。實(shí)驗(yàn)中還對(duì)兩種檢測(cè)SOD的活性方法進(jìn)行了比較，發(fā)現(xiàn)鄰苯三酚法對(duì)粗酶中SOD的活性測(cè)定更為準(zhǔn)確。本實(shí)驗(yàn)還成功獲得了兩段小分子肽段分別為酪蛋白和輔酶一