棉稈蛋白的提取及分離純化.pdf

1、本文采用不同的提取方法提取棉稈蛋白，對影響棉稈蛋白提取率的因素進(jìn)行了研究，并對棉稈蛋白進(jìn)行了分離純化，采用凝膠過濾柱層析和SDS-PAGE對棉稈蛋白分子量的組成情況進(jìn)行了初步了分析。 棉稈粗蛋白的提取實驗主要考慮的影響因素有：pH值、提取劑種類、提取劑濃度、提取溫度、提取時間、提取劑體積等。實驗中采用的提取方法有NaOH提取法、NaCl提取法、H2O提取法、超聲波法、纖維素酶法、表面活性劑法、AUC提取法、乙酸提取法。其中對Na

2、OH提取法、NaCl提取法、H2O提取法進(jìn)行了正交試驗，研究各方法對棉稈蛋白提取率的影響。結(jié)果表明，以NaOH為提取劑時，NaOH濃度為0.3﹪，提取溫度50℃，提取時間120min，提取劑體積100ml，提取2次，棉稈蛋白提取率可達(dá)72.60﹪；以NaCl為提取劑時，NaCl濃度為0.8﹪，提取溫度50℃，提取劑體積80ml，提取時間60min，提取2次，棉稈蛋白提取率達(dá)到52.03﹪；以H2O為提取劑時，提取溫度60℃，提取時間90

3、min，提取劑體積90ml，提取2次，棉稈蛋白提取率達(dá)到49.50﹪。本實驗采用堿性H2O2法對NaOH提取的棉稈蛋白進(jìn)行了脫色，研究結(jié)果表明，H2O2添加量12﹪，pH值9，脫色時間45min，脫色溫度45℃，蛋白得率為94.41﹪，脫色后蛋白呈乳黃色。棉稈蛋白的凝膠過濾柱層析結(jié)果表明，上述三種方法提取的棉稈蛋白中不同分子量的蛋白所占比例不同。SDS-PAGE分析結(jié)果表明，棉稈蛋白亞基分子量主要分布在20，000Da以下，40，000