花生(Arachis hypogaea)蛋白多肽提取、分離及純化.pdf

1、本課題將超聲技術(shù)用于提取花生分離蛋白的試驗(yàn)中,采用響應(yīng)面法優(yōu)化提取工藝,采用合理的試驗(yàn)設(shè)計(jì),依據(jù)回歸分析確定各因素對花生分離蛋白提取率的影響,得到了較好的結(jié)果,在固定堿液pH為9,超聲頻率為28KHz的基礎(chǔ)上,經(jīng)優(yōu)化后確定超聲輔助提取花生分離蛋白的最佳工藝條件為:超聲功率為210W,超聲時(shí)間為30min,超聲溫度為40℃,料液比為1:10.7.花生分離蛋白的最高提取率可達(dá)到80.09％.
　　在蛋白酶解制備花生蛋白的過程中采用微波

2、耦合酶法制備多肽,從五中常用的蛋白酶中選出最優(yōu)酶,木瓜蛋白酶與微波耦合酶解花生分離蛋白得到的短肽得率及蛋白水解度最高,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,固定微波功率為600W,底物濃度為4％,通過響應(yīng)面對影響酶解花生蛋白的條件進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳的酶解條件為:微波時(shí)間9.5 min，pH值7.1,微波溫度50℃,加酶量6500 U/g.在此條件下短肽得率為62％,蛋白水解度為25.89％.采用微波耦合酶解花生分離蛋白制備花生多肽比采用酶法制備花生多肽

3、有較好的短肽得率及蛋白水解度.
　　脫鹽過程中,通過對大孔樹脂脫鹽及納濾法脫鹽結(jié)果比較,大孔樹脂在選用流速為1.2BV/h,多肽濃度為20mg/ml,洗脫劑為75％的乙醇,測定花生多肽的脫鹽率達(dá)到85.43％,短肽得率為69.38％的脫鹽花生肽.在試驗(yàn)中,操作壓力為0.7MPa、料液濃度為5ug/mL、料液pH為8、料液溫度為35℃時(shí)的脫鹽率最高:56.43％,短肽得率為84.37％.大孔樹脂的脫鹽效果明顯比納濾脫鹽效果高,但是短

4、肽的率較納濾比較少,因此如果需要得到純度較大含鹽量較少的肽選用大孔樹脂法脫鹽,而對肽純度要求不高時(shí)選用納濾法脫鹽.
　　采用超濾技術(shù)對花生短肽進(jìn)行分離,實(shí)驗(yàn)確定的超濾的操作條件為:一級超濾的操作壓力為0.4MPa,料液濃度為2％,自然pH值;二級操作的操作壓力為0.5MPa,料液濃度為1.5％,自然pH值;三級超濾的操作壓力為0.5MPa,料液濃度為1％,自然pH值.并且通過凝膠柱層析Sphadex-G15對超濾后的花生肽進(jìn)行分子

5、量分布分析.
　　通過對花生多肽及各分子量段的肽進(jìn)行理化性質(zhì)的研究,表明,花生多肽與分離蛋白相比,花生多肽具有較好的溶解性,起泡性及乳化性,且5KD以上的分子量肽段具有較好的理化性質(zhì)更適合最為食品添加劑,抗氧化研究表明,花生肽具有顯著的抗氧化能力,其還原力較強(qiáng),對羥基自由基(?OH)、DPPH自由基的清除率十分明顯,但其在較高濃度下才表現(xiàn)出較明顯的抗亞油酸氧化能力.小于3KD分子量段的多肽抗氧化能力最強(qiáng),3KD~5KD分子量段的多