HIV派生的新型miRNA99對(duì)巨噬細(xì)胞釋放TNF-α、IL-6、IL-1β和吞噬功能的影響.pdf

1、目的:
　　探討HIV派生的新型miRNA99對(duì)巨噬細(xì)胞釋放TNF-α、IL-6、IL-1β及其吞噬功能的影響。
　　方法:
　　用佛波酯（PMA）刺激人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞（THP-1）分化成貼壁的巨噬細(xì)胞，倒差顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)并用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定CD11b并鑒定為巨噬細(xì)胞。將鑒定好的巨噬細(xì)胞進(jìn)行分組（分為對(duì)照組、LipidA組、miRNA-TAR組、miRNA99組），采用轉(zhuǎn)染試劑將化學(xué)合成的miRNAs瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至

2、巨噬細(xì)胞內(nèi)或用LipidA作用巨噬細(xì)胞，用人TNF-α、IL-6、IL-1βELISA試劑盒測(cè)定細(xì)胞上清液TNF-α、IL-6、IL-1β的水平。采用共聚焦顯微鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬熒光標(biāo)記的大腸桿菌的情況。將各組已吞噬熒光標(biāo)記的大腸桿菌的巨噬細(xì)胞制成單細(xì)胞懸液，用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞的吞噬率。
　　結(jié)果:
　　1.未經(jīng)PMA刺激的THP-1細(xì)胞呈單個(gè)懸浮狀態(tài)，圓形或類圓形，葡萄串樣聚集；經(jīng)PMA刺激后細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞伸出偽

3、足，呈梭形或多邊形，表明THP-1基本分化為巨噬細(xì)胞。
　　2.經(jīng)PMA刺激24小時(shí)后細(xì)胞表面CD11b陽性率在99％以上，說明THP-1細(xì)胞已大部分分化為巨噬細(xì)胞，可以用于后期的實(shí)驗(yàn)。
　　3.LipidA組與miR99組Mφ培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-6、IL-1β的含量均明顯高于對(duì)照組（p<0.05），有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但miR-TAR組與對(duì)照組無明顯差異（p>0.05）。而且miR99組較LipidA組TNF-α、IL

4、-6、IL-1β水平明顯升高，p<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　4.巨噬細(xì)胞胞漿內(nèi)呈現(xiàn)綠色熒光，說明巨噬細(xì)胞已吞噬熒光標(biāo)記的大腸桿菌。
　　5.各組巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力不同，經(jīng)miRNA99刺激的巨噬細(xì)胞吞噬細(xì)菌的能力較對(duì)照組明顯降低。前期研究已證明內(nèi)毒素能抑制巨噬細(xì)胞的吞噬功能。從上圖中得出，miRNA99組較LipidA組吞噬率降低明顯，說明miRNA99對(duì)巨噬細(xì)胞吞噬功能的損害較內(nèi)毒素更明顯。
　　結(jié)論: