應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法分析集胞藻PCC6803對(duì)己烷的耐受機(jī)理.pdf

1、近年的研究證明光合藍(lán)細(xì)菌是一個(gè)很好的細(xì)胞工廠,可以用來(lái)生產(chǎn)可再生的生物燃料和化學(xué)品,因?yàn)樗梢岳锰?yáng)能作為唯一能源,CO2作為唯一的碳源生長(zhǎng)。生物合成的碳中性的烷烴具有良好的化學(xué)特性,是很好的生物能源產(chǎn)品,但是烷烴對(duì)光合藍(lán)細(xì)菌有毒害作用,要想在光合藍(lán)細(xì)菌中實(shí)現(xiàn)烷烴的大規(guī)模生物合成,首先要解決的問(wèn)題就是提高光合藍(lán)細(xì)菌對(duì)烷烴的耐受性。
　　為了得到一株高耐受烷烴的菌株,我們利用iTRAQ標(biāo)記的定量蛋白質(zhì)組學(xué)分析方法通過(guò)LC-MS/M

2、S技術(shù),分析了光合藍(lán)細(xì)菌的模式菌株—集胞藻PCC6803在己烷脅迫下的反應(yīng)。該研究中我們共鑒定到1492個(gè)特有蛋白,占集胞藻基因組預(yù)測(cè)蛋白總數(shù)的42％,鑒定到的蛋白中有164個(gè)上調(diào)蛋白,77個(gè)下調(diào)蛋白,通過(guò)功能注釋和KEGG代謝途徑注釋分析得到,這些蛋白主要包括:轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白、膜結(jié)合蛋白、氧化應(yīng)激蛋白、硫中繼系統(tǒng)蛋白及光合作用相關(guān)蛋白,所以應(yīng)對(duì)己烷脅迫集胞藻會(huì)采用一般的應(yīng)激響應(yīng)機(jī)制,這些可能就是集胞藻應(yīng)對(duì)己烷壓力的主要保護(hù)機(jī)制。
　　

3、為了進(jìn)一步說(shuō)明蛋白質(zhì)組數(shù)據(jù)分析結(jié)果的可靠性,我們利用構(gòu)建突變株的方法進(jìn)行了驗(yàn)證,選擇蛋白質(zhì)組學(xué)數(shù)據(jù)中表達(dá)量上調(diào)的基因,構(gòu)建了△slr0298、△sll0779、△slr1490、△slr2131、△slr1205、△slr1828六個(gè)突變株,在正常BG-11培養(yǎng)基和加入0.8%己烷的BG-11培養(yǎng)基中測(cè)定了突變株和野生株的生長(zhǎng)情況,結(jié)果發(fā)現(xiàn)突變株與野生株相比生長(zhǎng)情況沒(méi)有明顯區(qū)別,說(shuō)明集胞藻對(duì)己烷的反應(yīng)比較復(fù)雜,對(duì)單一基因的改變不能夠全面