β-甘露聚糖酶的生產(chǎn)純化和性質(zhì)研究.pdf

1、甘露聚糖是軟木和廣泛分布在植物組織中半纖維素的主要成分。主要的甘露聚糖降解酶是β-甘露聚糖酶、β-甘露糖苷酶和β-葡糖甘酶。β-甘露聚糖酶是起主要作用的水解酶，攻擊甘露聚糖主鏈內(nèi)部的糖苷鍵，釋放短的β-1,4-甘露低聚糖。
　　從山東省工業(yè)微生物菌種保藏中心的7株芽孢桿菌為實(shí)驗(yàn)材料，用培養(yǎng)基透明圈法從7種芽孢桿菌中篩選到酶活最高Bacillus subtilis S-88、高龍枯草芽孢桿菌w-0313.83、地衣芽孢桿菌3.83。

2、用測(cè)定發(fā)酵液酶活的方法進(jìn)行菌株的復(fù)篩，篩的酶活最高的菌株為Bacillus subtilis S-88且酶活力為907.486mg/mL·min。
　　該菌產(chǎn)酶條件進(jìn)行了單因素實(shí)驗(yàn)發(fā)酵條件的優(yōu)化，最優(yōu)產(chǎn)酶條件為：最佳碳源是魔芋粉，含量為4％，最佳有機(jī)氮源為酵母浸粉，最佳無(wú)機(jī)氮源為硝酸鈉，經(jīng)過(guò)氮源的經(jīng)濟(jì)性評(píng)價(jià)得到最優(yōu)有機(jī)氮源為玉米黃粉，最優(yōu)無(wú)機(jī)氮源為硫酸銨，最佳產(chǎn)酶時(shí)間為36h。
　　本文用Bacillus subtilis

3、S-88以魔芋粉為底物，生產(chǎn)β-甘露聚糖酶。并通過(guò)梯度硫酸銨鹽析、離心、AKTA脫鹽柱脫鹽、陰離子交換樹脂、G-75凝膠電泳等的手段分離得到純化的酶，最終測(cè)得比酶活為61697.52IU mL-1。通過(guò)SDS-PAGE測(cè)得純化得到的為電泳純的蛋白，分子量為30kda且其分子量遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于細(xì)菌產(chǎn)的β-甘露聚糖酶分子量(50 kda)。
　　最后對(duì)Bacillus subtilis S-88產(chǎn)的β-甘露聚糖酶的性質(zhì)進(jìn)行了檢測(cè)。該酶的最適反

4、應(yīng)溫度為55℃、最適反應(yīng)pH為6.0。細(xì)菌產(chǎn)β-甘露聚糖酶最適pH多在5.5-7.0之間而該酶在pH4.4-6.8之間比較穩(wěn)定，有比較寬的pH穩(wěn)定范圍，有很好的耐酸性，且該酶的最穩(wěn)定測(cè)定pH為6.0。Bacillus subtilis S-88分泌的β-甘露聚糖酶在55℃以下，保溫2 h酶活幾乎不變，55℃時(shí)剩余94.87%。因此，該酶的穩(wěn)定溫度是小于55℃。此外，此β-甘露聚糖酶在沸水浴10min以內(nèi)殘余酶活在60%以上，粗酶液需要滅