嗜熱擬青霉J18木聚糖酶的純化和性質(zhì).pdf

1、本文以新篩選到的嗜熱擬青霉J18為木聚糖酶生產(chǎn)菌株，研究了其液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶條件及木聚糖酶的純化和性質(zhì)，主要結(jié)果如下： 以嗜熱擬青霉J18為出發(fā)菌株，研究了液態(tài)發(fā)酵產(chǎn)酶條件。木糖、低聚木糖和木聚糖均能誘導(dǎo)木聚糖酶的合成；玉米芯為碳源和誘導(dǎo)物能夠得到較高的產(chǎn)酶量。經(jīng)搖瓶發(fā)酵實(shí)驗(yàn)優(yōu)化：以胰蛋白胨為氮源，初始pH7.5，50℃下培養(yǎng)5d，木聚糖酶濃度達(dá)1276u/mL，這表明該菌株能夠利用廉價(jià)的玉米芯生產(chǎn)木聚糖酶，同以木聚糖為碳源相比，降

2、低了生產(chǎn)成本。 以嗜熱擬青霉發(fā)酵液為粗酶液，經(jīng)硫酸銨沉淀、凝膠過(guò)濾層析、離子交換層析，得到了經(jīng)SDS-PAGE確認(rèn)的純酶，純化過(guò)程中酶活回收率為38.3％，純化倍數(shù)為2.4，純酶比活為1229.4u/mg。SDS-PAGE法測(cè)定酶的分子量為25.8kDa；經(jīng)高碘酸-Schiff法染色表明該酶為糖蛋白，糖含量約為21％；該木聚糖酶富含甘氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、酪氨酸等。 本研究的木聚糖酶屬耐熱木聚糖酶，其最適反應(yīng)溫度為75

3、～80℃，75℃下處理30min仍然穩(wěn)定；最適pH為6.5～7.5，在pH6.0～11.0范圍內(nèi)穩(wěn)定，表現(xiàn)出了優(yōu)良的耐堿性。對(duì)酶活起明顯抑制作用的物質(zhì)包括：Mn2+、Mg2+、Ni2+和EDTA；對(duì)酶活起促進(jìn)作用的金屬離子有Fe2+、Ag+、Fe3+。該木聚糖酶具有很強(qiáng)的底物專一性，對(duì)木聚糖以外的多糖均沒(méi)有活性，也沒(méi)有糖苷酶活性。該酶水解木聚糖的產(chǎn)物以木二糖、木三糖為主，不含木單糖，所以適合用于生產(chǎn)低聚木糖。它雖然不能作用于木二糖、木三