京尼平交聯(lián)兔脫細胞氣管基質(zhì)材料結構完整性、免疫原性及生物力學性能的實驗研究.pdf

1、目前，脫細胞技術廣泛應用于器官重建基質(zhì)材料制備的研究。本文旨在通過去污劑-聯(lián)合酶法(detrgent-enzymatic method，DEM)對新西蘭兔氣管實施脫細胞處理，研究經(jīng)脫細胞處理后氣管基質(zhì)材料結構完整性、免疫原性及生物力學性能的變化;并通過對脫細胞氣管基質(zhì)材料進行京尼平交聯(lián)，研究經(jīng)交聯(lián)后氣管基質(zhì)材料生物相容性、生物力學性能及血管再生性能的變化。本研究內(nèi)容包括以下二部分:
　　第一部分 去污劑-聯(lián)合酶法行兔脫細胞氣管基質(zhì)

2、材料的制備及性能評價
　　目的:研究兔氣管支架最佳脫細胞周期，進行氣管基質(zhì)材料細胞外基質(zhì)結構及生物力學性能評價。
　　方法:選取50只健康新西蘭兔，體質(zhì)量2.5～3.0 kg，雌雄不限。隨機數(shù)字表法分為10組(n=5)，A組5只氣管作為新鮮對照組，B、C、D、E、F、G、H、I、J組對應脫細胞1、3、5、6、7、8、9周期組、異體移植組、異體移植對照組。通過去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)分別對氣管進行周期脫細胞處理，通過HE染色

3、、Movat五色染色、DAPI染色顯微鏡觀察，掃描電鏡(scanning electron microscope，SEM)觀察，以及生物力學性能測定，遴選出最佳脫細胞周期。選取原生氣管基質(zhì)材料及最佳脫細胞周期氣管基質(zhì)材料，應用免疫組織化學法檢測主要組織相容性復合體第二型(major histocompatibility complex classⅡ，MHC-Ⅱ)、堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth f

4、actor, bFGF)的表達，番紅O染色觀察，糖胺聚糖(glycoasminoglycan，GAG)含量、細胞含量以及DNA含量檢測。
　　結果:與對照組相比，經(jīng)7個DEM循環(huán)之后組織工程基質(zhì)細胞核溶解、極少數(shù)細胞核殘留，組織結構未見明顯破壞;組織學與分子生物學分析顯示，細胞成分及細胞核物質(zhì)近乎全部去除;SEM顯示脫細胞基質(zhì)依然保持完整的結構體系;生物力學性能檢測顯示脫細胞并未對基質(zhì)形態(tài)學及機械性能產(chǎn)生明顯影響;免疫熒光分析顯示

5、脫細胞氣管基質(zhì)細胞核物質(zhì)顯著減少(P＜0.05); DNA量化結果顯示:脫細胞基質(zhì)中DNA含量為(42.39±6.66)ng/mg，與原生組織(586.78±53.56)ng/ml相比，減少92.78％(P＜0.01)。
　　結論:通過7個周期DEM處理，能夠有效獲取長段低免疫原性兔脫細胞氣管基質(zhì)材料，具有與原生氣管相似的結構特征及生物力學性能，是一種較為理想的氣管基質(zhì)支架材料。
　　第二部分 京尼平交聯(lián)對兔脫細胞氣管基質(zhì)材

6、料生物力學性能及血管生成的影響
　　目的:對經(jīng)DEM法脫細胞處理的氣管基質(zhì)材料進行京尼平交聯(lián)，研究京尼平對脫細胞氣管基質(zhì)生物力學性能及血管生成性能的影響。
　　方法:采用去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)對新西蘭兔氣管行脫細胞處理，用京尼平交聯(lián)，對交聯(lián)后的基質(zhì)材料行生物力學測試、雞胚絨毛尿囊膜(chicken embryo chorioallantoic membrane，CAM)血管再生實驗及氣管基質(zhì)材料異體移植實驗研究。