堿性艷藍(lán)BO對(duì)凝膠上的DNA的檢測(cè)及相關(guān)檢測(cè)機(jī)制的研究.pdf

1、目的:
　　 1.研究開發(fā)快速、靈敏、親環(huán)境的DNA檢測(cè)方法，為聚丙烯酰胺凝膠和瓊脂糖凝膠上DNA的檢測(cè)提供合適的方法;
　　 2.探究凝膠上DNA的檢測(cè)機(jī)理，闡明VPBBO染料與核酸的相互作用，探討了其作用方式和作用機(jī)理，將有助于人們從分子水平上了解檢測(cè)機(jī)制。
　　 方法:
　　 1.DNA染料檢測(cè)方法:選用堿性艷藍(lán)BO(VPBBO)染料，考察影響檢測(cè)結(jié)果的各個(gè)因素，如染色液的濃度及組成、染色時(shí)間、脫色

2、時(shí)間及各種鹽離子對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響等，建立DNA染料檢測(cè)操作步驟;
　　 2.為了能更深入的研究染料檢測(cè)的機(jī)理，通過采用光譜法、粘度法、分子對(duì)接模擬、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同研探究染料與DNA的相互作用。
　　 結(jié)果:
　　 1.分別在瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠上建立了DNA染料檢測(cè)方法，靈敏度分別為0.4-0.8 ng/band和0.8-1.6 ng/band，其操作步驟分別如下:
　　 (1)瓊脂糖凝

3、膠a、染色:在25 ml組成為0.005％ VPBBO/10％乙醇/0.1％ NaHCO3的染色液中染色10 min;
　　 b、脫色:在25 ml組成為40％乙醇/1％乙酸脫色液中脫色3-5 min。
　　 (2)聚丙烯酰胺凝膠a、染色:在50 ml組成為0.001％ VPBBO染色液中染色10 min;
　　 b、水洗:在50 ml DW中水洗1 min。
　　 2.通過采用光譜法、粘度法、分子對(duì)接模

4、擬法、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同探究染料與DNA的結(jié)合機(jī)制，VPBBO染料和DNA以溝槽形式相結(jié)合。
　　 結(jié)論:
　　 1.新建立的DNA染料檢測(cè)方法在瓊脂糖凝膠和聚丙烯酰胺凝膠上的靈敏度分別為0.8-1.6 ng/band和0.4-0.8 ng/band，與EB熒光染色法相似;
　　 2.通過采用光譜法、粘度法、分子對(duì)接模擬法、質(zhì)譜法等多種研究手段來共同研探究染料與DNA的結(jié)合的機(jī)制，VPBBO染料和DNA以