2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩49頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:
  1.研發(fā)一種操作便捷、靈敏度高、專屬性強(qiáng)的磷酸化蛋白檢測技術(shù);
  2.為磷酸化蛋白的檢測提供染色方法,進(jìn)一步促進(jìn)該領(lǐng)域的發(fā)展。
  方法:
  1.以紅紫素為染料,聚丙烯酰胺凝膠為載體,對磷酸化蛋白進(jìn)行染色,通過篩選各種影響因素,包括染色液組成成分、染料濃度、染色時(shí)間等,探索各種影響因素的最佳條件,從而建立一種完整的紅紫素染色方法;2.使用一向凝膠電泳技術(shù)(1-D),分別將標(biāo)準(zhǔn)蛋白、小鼠腦組織中提取

2、的總蛋白和人源成纖維細(xì)胞中提取的總蛋白進(jìn)行分離,并采用不同的磷酸化蛋白染色檢測技術(shù)進(jìn)行分析,比較各種方法的靈敏度、磷酸化蛋白專屬性以及線性范圍等參數(shù);
  3.使用二向凝膠電泳技術(shù)(2-D),分別將小鼠腦組織中提取的總蛋白和人源成纖維細(xì)胞中提取的總蛋白進(jìn)行分離,并分別用紅紫素染色法和Pro-QDiamond染色法進(jìn)行染色分析,比較兩種方法的專屬性及與2-D的兼容性;4.使用Western Blot檢測技術(shù)和去磷酸化檢測技術(shù),通過比

3、較紅紫素染色法與Pro-Q Diamond染色法的檢測結(jié)果,驗(yàn)證紅紫素染色法對磷酸化蛋白的專屬性。
  5.使用生物質(zhì)譜分析技術(shù),鑒定實(shí)際樣品中被檢測到的磷酸化蛋白,進(jìn)一步驗(yàn)證紅紫素染色法對磷酸化蛋白的專屬性。
  結(jié)果:
  1.以紅紫素-Al3+復(fù)合物為熒光探針,對影響檢測效果的各種因素進(jìn)行篩選,建定了一種在聚丙烯酰胺凝膠上的磷酸化蛋白染色檢測方法,具體步驟為:1)染色:將電泳后的聚丙烯酰胺凝膠放在盒子中,加入50

4、 mL染色液(3μM紅紫素,50μM Al3+,30%甲酰胺,40%甲醇,pH5.0的250 mMNaAc-HAc),在50℃條件下,振搖50分鐘;
  2)脫色:去除染色液,加入50 mL的脫色液(50%甲醇,pH4.0的500 mMNaAc-HAc),室溫振搖1-3分鐘。
  2.通過一向凝膠電泳技術(shù),確定紅紫素染色法的檢測靈敏度為4-8 ng,優(yōu)于 Pro-Q Diamond染色法的8-16 ng;同時(shí),紅紫素染色法對

5、磷酸化蛋白擁有較強(qiáng)的專屬性。
  3.通過對小鼠腦蛋白和人源成纖維細(xì)胞蛋白的檢測與對比,說明紅紫素染色法對實(shí)際樣品磷酸化蛋白的專屬性略優(yōu)于Pro-Q Diamond染色法。
  4.通過二向凝膠電泳技術(shù),明確紅紫素染色法無論對標(biāo)準(zhǔn)蛋白,還是對實(shí)際樣品中磷酸化蛋白的檢測,與2-D的兼容性跟Pro-Q Diamond染色法相似,并且重現(xiàn)性也比較好。
  5.通過Western Blot技術(shù),說明紅紫素染色法對實(shí)際樣品中磷酸

6、化蛋白具有較強(qiáng)的專屬性,與Pro-Q Diamond染色法相當(dāng),甚至優(yōu)于Pro-Q Diamond染色法。
  6.通過去磷酸化檢測技術(shù),說明紅紫素染色法對標(biāo)準(zhǔn)蛋白和實(shí)際樣品中磷酸化蛋白的專屬性與Pro-Q Diamond染色法相似。
  7.通過生物質(zhì)譜技術(shù),對紅紫素染色法檢識出的小鼠腦蛋白和人源成纖維細(xì)胞蛋白中的磷酸化蛋白進(jìn)行檢測,檢測到的磷酸化蛋白個(gè)數(shù)分別為11個(gè)和12個(gè),進(jìn)一步說明紅紫素染色法對實(shí)際樣品具有較強(qiáng)的專屬

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論