基于鈾酰配合物檢測二磷酸果糖和分離富集磷酸化蛋白.pdf

1、本文在前言部分首先介紹了二磷酸果糖的性質(zhì)及其目前主要的檢測方法，然后介紹了蛋白質(zhì)磷酸化的意義并概述了磷酸化蛋白分離富集研究進(jìn)展，同時(shí)闡述了鈾酰salophen配合物結(jié)構(gòu)特性及其一些應(yīng)用，最后介紹了氨基熒光素的性質(zhì)和應(yīng)用。
　　第二章我們合成了一種Salophen與熒光素的連接物以用作鈾酰的熒光探針。首先用水楊醛和3,4-二氨基苯甲酸合成含羧基的四齒西佛堿配體Salophen，再將Salophen與5-氨基熒光素通過縮合反應(yīng)生成連接

2、物Salophen-熒光素。然后將Salophen-熒光素與鈾酰反應(yīng)生成配合物鈾酰-Salophen-熒光素。用紅外光譜、紫外可見吸收光譜和熒光光譜研究了salophen-熒光素及其與鈾酰的配合物的光譜性質(zhì)。合成的Salophen-熒光素的熒光強(qiáng)于5-氨基熒光素，但弱于其與鈾酰的配合物。一定條件下 Salophen-熒光素的熒光強(qiáng)度隨著鈾酰濃度的增加而線性地增強(qiáng)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明Salophen-熒光素可作為鈾酰的熒光探針。
　　在第

3、三章中我們介紹了一種雙受體夾心熒光法法檢測二磷酸果糖的分析方法，并且在檢測中我們以1,6-二磷酸果糖(F-1,6-BP)作為目標(biāo)分析物。方法中的固相受體是通過共價(jià)鍵接枝到載玻片上的固相化鈾酰-salophen配合物（簡寫為IUS）。標(biāo)記受體則是一種用熒光素標(biāo)記的鈾酰-salophen，即鈾酰-salophen-熒光素（簡寫為USF）。在這種雙受體夾心法中，檢測樣品中F-1,6-BP的步驟如下， F-1,6-BP首先通過配位反應(yīng)與IUS相

4、結(jié)合，然后再與USF結(jié)合，最終形成一種IUS-F-1,6-BP-USF的夾心式結(jié)構(gòu)。我們通過測定結(jié)合在載玻片上的IUS-F-1,6-BP-USF的熒光強(qiáng)度來達(dá)到定量測定F-1,6-BP的目的。在最佳條件下，測得F-1,6-BP的線性范圍為0.05-5 nmol/mL，最低檢測限為0.027 nmol/mL。實(shí)驗(yàn)表明，該方法能成功的用于分離測定實(shí)際樣品中的F-1,6-BP，并且結(jié)果令人滿意。
　　在第四章中我們介紹了一種應(yīng)用固定化金

5、屬離子層析柱法對磷酸化蛋白進(jìn)行分離富集的方法。該方法基于鈾酰-salophen對磷酸基團(tuán)的特異性吸附而建立。我們制備了將鈾酰-salophen結(jié)合在硅膠上的粒子（USSG粒子）并將其作為磷酸化蛋白的固相受體。用這種粒子制備了固定化金屬離子層析柱。在一分離過程中，先將蛋白質(zhì)酶解為多肽，然后使多肽通過層析柱，層析柱中的USSG粒子可將磷酸化多肽捕獲。再用0.5 mol/L鹽酸洗脫被捕獲的磷酸化多肽，從而達(dá)到分離富集磷酸化蛋白的目的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果