基于鈦修飾的新型富集材料在磷酸化肽段富集中的應(yīng)用.pdf

1、磷酸化是蛋白質(zhì)翻譯后修飾的重要方式之一，特別是在真核細(xì)胞中，蛋白質(zhì)的可逆磷酸化過程調(diào)節(jié)著生物體內(nèi)大部分的生命活動(dòng)。因此，蛋白質(zhì)磷酸化研究一直是蛋白質(zhì)組學(xué)的研究熱點(diǎn)。然而，由于在生物體內(nèi)，磷酸化蛋白質(zhì)的含量很低，磷酸化肽段的離子化效率不高，以及大量非磷酸化肽段對(duì)其質(zhì)譜信號(hào)的抑制，使得磷酸化肽段的鑒定及其位點(diǎn)分析變得更加困難。所以在質(zhì)譜分析前，對(duì)磷酸化肽段進(jìn)行有效的富集顯得尤為重要。常見的磷酸化肽段富集方法包括：免疫共沉淀法，金屬離子親和色

2、譜法，金屬氧化物親和色譜法，離子交換色譜法等。但是這些方法大多存在富集專一性不夠的缺陷，非特異性吸附往往干擾了磷酸化肽段的檢出。雖然采用聯(lián)用方法可予以改善，但是在改善富集專一性的同時(shí)卻使富集步驟變得復(fù)雜，特別是在多步富集中，不可避免地造成磷酸化肽段的損失。
　　 本論文針對(duì)上述問題，合成了兩種新型的功能化納米材料，在改善磷酸化肽段富集專一性的同時(shí)，簡(jiǎn)化了富集步驟，并評(píng)價(jià)了二者在磷酸化肽段富集中的效果。
　　 基于限進(jìn)介質(zhì)

3、和介孔材料，合成了一種外表面親水的鈦硅骨架介孔材料。材料的親水性外表面增加了生物相容性，合適的孔徑能將體系中未完全消解的蛋白質(zhì)大分子排阻在外，骨架中的鈦對(duì)磷酸化肽段有特異性親和作用。利用該種材料富集磷酸化肽段，檢測(cè)靈敏度能夠達(dá)到5 fmol/μL。基于陰離子交換和鈦離子親和作用，合成了一種兼具陰離子交換和金屬離子親和雙功能基團(tuán)的材料。材料中的陰離子交換功能基團(tuán)與金屬離子親和的共同作用，能有效降低非磷酸化肽段的酸性氨基酸殘基的非特異性吸附