抗對(duì)硫磷基因工程四價(jià)抗體在大腸菌中的高效表達(dá).pdf

1、1、抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體表達(dá)載體構(gòu)建
　　 根據(jù)抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體基因序列設(shè)計(jì)對(duì)應(yīng)對(duì)引物,用經(jīng)優(yōu)化后的PCR反應(yīng)條件擴(kuò)增得到抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體基因后經(jīng)酶切、PCR擴(kuò)增初步驗(yàn)證及基因測(cè)序確認(rèn)為目的基因后,將其與達(dá)載體pTO-T7連接,轉(zhuǎn)化大腸桿菌rigami2(DE3),成功構(gòu)建抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體表達(dá)載體。
　　 2、抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體的表達(dá)及檢測(cè)
　　 抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體表達(dá)載體經(jīng)IPTG誘導(dǎo)目的基因表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-P

2、AGE檢測(cè)蛋白分子量和Western Blot特異性鑒定,結(jié)果表明,雖然表達(dá)產(chǎn)物中仍有包涵體,但與抗體改造前相比,可溶性蛋白含量已得到顯著提高,經(jīng)濃度測(cè)定得知目的蛋白濃度為0.29 mg／ml。
　　 3、抗對(duì)硫磷四價(jià)抗體的ELISA反應(yīng)活性檢測(cè)
　　 改造后的基因工程抗體經(jīng)純化后用ELISA方法測(cè)定生物學(xué)活性,并與實(shí)驗(yàn)室保存的單克隆抗體、單鏈抗體、前期制備的四價(jià)抗體相比較,ELISA結(jié)果顯示該抗體與對(duì)硫磷特異結(jié)合呈陽(yáng)性