抗CD22人源化基因工程多價(jià)微型抗體的初步表達(dá).pdf

1、1997年，美國FDA批準(zhǔn)了有史以來第一個(gè)癌癥治療的裸抗體——“美羅華”嵌合抗體(Rituxan)。盡管美羅華對(duì)非霍奇金淋巴瘤(NHL)有效而且毒性可以控制，但并不是對(duì)所有的病人都有療效，甚至所有有治療反應(yīng)的病人最后都會(huì)復(fù)發(fā)，然而美羅華激勵(lì)研究者去尋找新的靶點(diǎn)。CD22是眾多靶點(diǎn)中的一個(gè)，表達(dá)于正常和癌變的B細(xì)胞表面。以CD22為靶點(diǎn)的治療不會(huì)影響任何不表達(dá)CD22的組織，也不會(huì)抑制新的B細(xì)胞生成。 NHL的治療方法有放射治療、

2、外科治療、生物治療等。免疫導(dǎo)向治療作為生物治療的一種，在淋巴瘤治療中將發(fā)揮重要作用。研究結(jié)果表明，多價(jià)微型抗體由于抗原結(jié)合位點(diǎn)數(shù)目的增加而有效地提高了其親和性，所形成的抗原．抗體復(fù)合物更為穩(wěn)定，更適宜于免疫導(dǎo)向治療。 本實(shí)驗(yàn)的主要目的是探索表達(dá)抗CD22人源化基因工程多價(jià)微型抗體的方法，以期獲得表達(dá)目的抗體的基因工程菌株和重組病毒株。 本實(shí)驗(yàn)首先通過PCR分別擴(kuò)增出目的基因Fc-500、CH3-1300、Fc-1600，

3、再通過亞克隆構(gòu)建分泌表達(dá)質(zhì)粒pPIC9-CH3和pPIC9-Fc，電轉(zhuǎn)化到巴斯德畢赤氏酵母GS115中，通過同源重組，將目的基因整合到GS115基因組中進(jìn)行表達(dá)。研究表達(dá)產(chǎn)物，證明獲得可以表達(dá)抗CD22人源化基因工程多價(jià)微型抗體的菌株GS115-CH3、GS115.Fc。將這兩株酵母菌傳代4次后，通過PCR檢測(cè)，證明這兩株菌都具有較高的穩(wěn)定性。 另外，構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pAcSG2-CH3和pAcSG2-Fc，將pAcSG2-CH3質(zhì)