冷誘導(dǎo)胡蘿卜粗提物對嗜酸乳桿菌的保護作用研究.pdf

1、作為一種新型冷凍保護劑，抗凍蛋白已經(jīng)引起了學(xué)者們的充分重視，但是對于外源添加抗凍蛋白對細菌的凍干保護效應(yīng)尚未見報道。本研究的主要目的在于，對自主分離的嗜酸乳桿菌，采用體外抑菌活性作為主要的功能性評價指標，從冷誘導(dǎo)的胡蘿卜中制備蛋白質(zhì)粗提物，將其作為保護劑原料，探討抗凍蛋白作為嗜酸乳桿菌凍干保護劑應(yīng)用的可能性，并對其凍干保護機理進行初步探討。
　　 1.對自主分離的嗜酸乳桿菌，進行生理生化鑒定，并測定其基本特性。結(jié)果表明，經(jīng)過生理

2、生化鑒定，初步判定分離菌株La為乳桿菌屬嗜酸乳桿菌種(Lactobacillusacidophilus)；La菌株對人工模擬胃腸道環(huán)境具有較好耐受能力，在pH1.5的人工胃液中處理4h，仍有少量菌落存活，而在人工腸液和0.5％的高膽酸鹽中，分別處理3h和5h，其活菌數(shù)均維持在107ml-1水平上；且菌株的穩(wěn)定性較好，能耐受的最高溫度為60℃，最高滲透壓為6％的氯化鈉添加量。
　　 2.測定La菌株在乳中的生長特性(pH和滴定酸度

3、的變化)，采用雙層平板打孔法測定La菌株的抑菌活性，并對抑菌物質(zhì)進行初步分析。結(jié)果表明，嗜酸乳桿菌La菌株最高滴定酸度為121.87°T，最低pH達到3.87；對病原菌E.coli和S.aureus生長有一定的抑制作用，抑菌圈直徑分別為20.13±1.08mm和15.14±0.94mm，其代謝可以產(chǎn)生具有一定抑菌效應(yīng)的有機酸和肽類物質(zhì)，且該肽類物質(zhì)不耐堿，具有菌株專一性。
　　 3.制備冷誘導(dǎo)的胡蘿卜蛋白質(zhì)粗提物，設(shè)計六組凍干保

4、護劑配方，以細菌存活率作為指標檢測該粗提物的凍干保護效果；并在掃描電鏡下觀察凍干菌粉的形態(tài)特征。試驗結(jié)果顯示：冷誘導(dǎo)胡蘿卜在12.5KD和36KD分子量處出現(xiàn)疑似抗凍蛋白條帶；不同保護劑對嗜酸乳桿菌的凍干保護效應(yīng)差異顯著(p<0.05)，添加冷誘導(dǎo)胡蘿卜粗提物的復(fù)合保護劑凍干保護效果最優(yōu)，其細菌存活率達到76.02％；最佳保護劑配方為：10％脫脂乳，10％麥芽糊精，10％海藻糖，1.0％L-Cys，2.0％VC，2.0％甘油，0.8％硫