優(yōu)良嗜酸乳桿菌的選育及其菌劑制備技術研究.pdf

1、人體微生態(tài)系統(tǒng)的平衡穩(wěn)定對人體身體健康有著非常重要的意義，是維持健康的必要因素之一；嗜酸乳桿菌在其中扮演著重要角色，對人體有強大的益生功能。經過長時間的演化，不同宿主來源的嗜酸乳桿菌對宿主細胞黏附具有特異性；因此篩選一株能耐受胃腸道惡劣環(huán)境、抑菌能力強、黏附性能好的優(yōu)良人源性嗜酸乳桿菌，是開發(fā)功能性食品、活菌制劑、保健藥品等產品的關鍵。高密度培養(yǎng)技術和真空冷凍干燥技術是乳酸菌菌劑制備的核心技術；優(yōu)化嗜酸乳桿菌的高密度培養(yǎng)工藝和真空冷凍干

2、燥技術能提高生產效率，保證產品標準化，維持產品穩(wěn)定性，延長貨架期。
　　本研究首先利用低pH環(huán)境和高膽鹽濃度環(huán)境從7個7-14天內健康新生兒新鮮糞便樣品中篩選獲得8株耐酸耐膽鹽性能優(yōu)良的革蘭氏陽性桿菌菌株。利用菌落形態(tài)、生理生化特征和分子生物學鑒定，篩選出2株嗜酸乳桿菌，分別命名為嗜酸乳桿菌LaNCU401和嗜酸乳桿菌LaNCU402。
　　針對LaNCU402進行益生功能的研究發(fā)現：LaNCU402對模擬胃腸道環(huán)境的抗脅迫

3、能力強，人工胃腸液作用12 h后，活菌濃度仍保持在107cfu/mL以上；對Caco-2細胞系具有較好的黏附性能，黏附指數達9.52±1.40/Caco-2；抑菌方面LaNCU402對常見致病菌有較好的抑制作用，對益生菌的生長沒有影響；LaNCU402與嗜酸乳桿菌ATCC4356有相似的抗藥性，具有一定的抗藥性能。
　　本文通過高密度培養(yǎng)技術和真空冷凍干燥技術的優(yōu)化對LaNCU402菌劑制備技術進行研究。采用FFD、SA和CCD試

4、驗設計對增菌培養(yǎng)基進行優(yōu)化，得到優(yōu)化培養(yǎng)基為：葡萄糖1.5％、蛋白胨1%、牛肉膏1.4584%、酵母粉0.4%、檸檬酸三銨0.2%、K2HPO40.2%、MgSO4?7H2O0.02%、MnSO4?4H2O0.005%、NaAc?3H2O0.5%、乳糖1.7665%、番茄汁31.6029%、吐溫800.1%；以活菌濃度為響應值，對LaNCU402高密度培養(yǎng)條件優(yōu)化確定為：接種量4%，培養(yǎng)溫度設定為37℃培養(yǎng)22h后以33℃培養(yǎng)2h，堿流

5、加中和劑為氨水，培養(yǎng)pH為6.2；以此培養(yǎng)LaNCU402的活菌濃度可達到4.4967×109cfu/mL。對真空冷凍干燥技術優(yōu)化后，確定菌劑制備關鍵技術為：發(fā)酵液離心參數：4500rpm、15min，凍干保護劑為7%海藻糖和16%脫脂乳粉，凍干樣品厚度為4mm，以此條件真空冷凍干燥的LaNCU402菌粉的凍干存活率可達90.28%，在室溫、4℃和-20℃下貯藏3個月的相對存活率為80.15%、85.46%和89.97%。
　　綜