嗜酸乳桿菌NX2-6類細菌素高產(chǎn)菌株選育及應用的研究.pdf

1、乳酸菌(LAB)是被廣泛公認為安全(GRAS)級別的食品級微生物，能夠產(chǎn)生雙乙酰、有機酸（乙酸和乳酸）、細菌素和類細菌素等能殺滅食源性致病菌和食物腐敗菌的抑菌物質(zhì)。將發(fā)酵乳酸菌產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)應用于食品防腐保鮮中可以有效提高食品的安全性，有成為天然食品防腐劑的巨大潛力。
　　乳酸菌發(fā)酵產(chǎn)類細菌素的產(chǎn)量通常較低，沒有辦法滿足工業(yè)生產(chǎn)的需要，因此提高類細菌素的產(chǎn)量尤為的重要?；蚪M改組技術(shù)是近些年來發(fā)展起來的一種微生物新興育種技術(shù)，能夠

2、對類細菌素的增產(chǎn)起到良好的作用。
　　本研究以本實驗室中保藏的一株嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)NX2-6為出發(fā)菌株，采用多種選育方式提高其產(chǎn)類細菌素的能力，以期獲得性質(zhì)穩(wěn)固的高產(chǎn)菌株，為工業(yè)化生產(chǎn)和應用奠定良好基礎。主要研究成果如下:
　　1.通過物理和化學方法對嗜酸乳桿菌NX2-6誘變選育，獲得類細菌素產(chǎn)量提高的菌株。分別采用60Coγ射線、DES誘變和原生質(zhì)體紫外誘變?nèi)N誘變方法對其進

3、行誘變處理，通過計算致死率和正突變率，確定了60Coγ射線的最佳誘變劑量為2.0 kGy;DES誘變最佳濃度為0.7％，最佳作用時間為10 min;原生質(zhì)體紫外誘變最佳紫外照射時間為20 s。經(jīng)過初篩和復篩，篩選到3株高產(chǎn)菌，γ56、D47和UV156，其抑菌效價分別比出發(fā)菌株提高了2.56倍、2.04倍和2.96倍。
　　2.對嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)NX2-6原生質(zhì)體制備、再生及滅活條件

4、進行研究，確定制備原生質(zhì)體的最適條件為:將處于對數(shù)期的種子液進行二次轉(zhuǎn)接，在培養(yǎng)6h后收集菌體;選用高鹽緩沖液作為洗滌高滲液;再生培養(yǎng)基蔗糖濃度為0.2mol/L;最適溶菌酶的濃度為30 mg/mL;酶解溫度在37℃最佳;酶解時間在40 min時最好。原生質(zhì)體滅活最佳條件:熱滅活溫度為58℃、滅活時間為30 min;紫外滅活滅活時間為110s。
　　3.對高產(chǎn)菌株γ56、D47和UV156進行多輪基因組改組。確定了PEG誘導原生質(zhì)

5、體融合的最佳條件:PEG6000濃度為50％，pH值為9.0，誘導融合時間為10 min。獲得一株抑菌活性有明顯提高的融合子F50。通過測定其類細菌素抽提液的抑菌效價得出，其對藤黃微球菌的抑菌效價為30912.15 U/mL，比出發(fā)菌株抑菌效價(5495.41U/mL)提高了5.6倍，且傳代10代穩(wěn)定性良好。
　　4.嗜酸乳桿菌NX2-6產(chǎn)生的抑菌物質(zhì)對蘋果汁保鮮的應用研究表明，在28℃、45℃儲存條件下，分別添加0.1％和0.2