阿維菌素高產(chǎn)菌株的選育.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、阿維菌素(avermectins)是由阿維鏈霉菌(streptomycesavermitilis)發(fā)酵產(chǎn)生的是一組高效、低毒、廣譜的殺蟲抗生素,在醫(yī)藥、農(nóng)業(yè)和畜牧業(yè)生產(chǎn)中有良好的應用,并且具有廣闊的市場前景。本文對工業(yè)生產(chǎn)阿維菌素的阿維鏈霉菌菌株進行了基因工程改造研究。 orfX,aveR,afsR,afsQ1Q2是鏈霉菌中發(fā)現(xiàn)的四個正調(diào)控基因。本試驗將上述4個正調(diào)控基因通過接合轉(zhuǎn)移法導入到阿維菌素工業(yè)生產(chǎn)菌株Z1中,檢測其對阿

2、維菌素產(chǎn)生的影響。試驗結(jié)果表明orfX因有明顯促進作用,阿維菌素產(chǎn)量提高了約30%;aveR基因作用不十分明顯;afsR和afsQ1Q2基因使產(chǎn)素水平明顯降低。 本試驗進行了工業(yè)阿維鏈霉菌原生質(zhì)體制備研究。試驗結(jié)果顯示阿維鏈霉菌原生質(zhì)體制備的最佳條件為:250ml三角瓶裝有35ml含0.5%甘氨酸的YEME培養(yǎng)基,孢子懸液接種,28℃,200r/min培養(yǎng)40h;3000r/min收集菌絲體,用10.3%蔗糖溶液清洗2次;溶菌酶

3、濃度為4mg/ml的P緩沖液懸浮菌絲體,30℃下處理50min完成原生質(zhì)體制備。50%PEG1000做促融劑,原生質(zhì)體融合率最高。利用OLM菌株(AprR)和Z1菌株(SpcR)進行連續(xù)融合發(fā)現(xiàn),經(jīng)過連續(xù)5輪融合,融合效率可達41.6%,并達到穩(wěn)定。 以四株不同產(chǎn)量和來源的阿維鏈霉菌作為出發(fā)菌株,通過過五輪基因組重排處理,比較發(fā)現(xiàn),隨著基因組重排的深入,重組群體中高效價菌株的比率例在逐步提高。五輪基因組重排后得到了2株高產(chǎn)菌株,

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