南極磷蝦蝦油中磷脂酰膽堿的提取、分離與分析.pdf

1、南極磷蝦作為一種新型漁業(yè)資源,因其在南大洋中生物量上的優(yōu)勢(shì)而具有極大的開發(fā)潛力。南極磷蝦脂質(zhì)占南極磷蝦干重的12~50％,其中磷脂酰膽堿的含量達(dá)20~33%,是磷脂酰膽堿的良好來源之一。磷脂酰膽堿是一種生物活性分子,可以用作天然乳化劑、保濕劑和穩(wěn)定劑,廣泛應(yīng)用于化妝品、藥品制造業(yè)及餐飲業(yè)等領(lǐng)域。因此,磷脂酰膽堿,特別是純度較高的磷脂酰膽堿具有很大的商業(yè)和應(yīng)用價(jià)值。
　　本文使用實(shí)驗(yàn)室常用有機(jī)溶劑分別對(duì)南極磷蝦蝦油中的磷脂酰膽堿進(jìn)行

2、單一溶劑提取,根據(jù)提取效果和有機(jī)溶劑性質(zhì)確定了無水乙醇和丙酮作為提取溶劑。提取所得粗提樣在高效薄層層析硅膠板GF254上有很好的分離效果,說明分離得到的各個(gè)部分極性差異較明顯,有易于柱層析后續(xù)分離純化磷脂酰膽堿。因此,設(shè)計(jì)兩種方法從南極磷蝦蝦油中提取分離純化磷脂酰膽堿,并進(jìn)行定性定量分析。
　　第一,以無水乙醇作為提取溶劑得到乙醇粗提樣后,以95%乙醇為洗脫劑通過氧化鋁柱進(jìn)行柱層析分離得到主要成分為磷脂酰膽堿的純化乙醇樣品。整個(gè)提

3、取分離過程只使用乙醇溶劑,可以提高樣品的安全性。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)探索,乙醇提取的優(yōu)化條件為料液比1:7(W/V)、提取時(shí)間30min、提取溫度25℃,該條件下提取六次乙醇粗提樣得率為57.33%±2.48%,高效薄層層析分離后磷脂酰膽堿所占比重為24.73%±0.31%。乙醇粗提樣經(jīng)高效薄層掃描法定量可得,每克蝦油中乙醇可溶性磷脂酰膽堿為0.125g±0.003g,該方法重復(fù)性、穩(wěn)定性好,耗時(shí)短較經(jīng)濟(jì)。氧化鋁柱分離所

4、得純化乙醇樣品經(jīng)高效液相色譜定性檢測(cè)磷脂酰膽堿的純度可以達(dá)到79.83%±2.44%。
　　第二,以丙酮為提取溶劑提取出丙酮粗提樣,以氯仿-甲醇混合溶劑為洗脫劑經(jīng)硅膠柱層析分離出純化丙酮樣品,對(duì)純化丙酮樣品進(jìn)行進(jìn)一步的分析鑒定。
　　通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn)探索表明,丙酮提取的優(yōu)化條件為料液比1:10(W/V),提取時(shí)間50min,提取溫度20℃,該條件下提取六次丙酮粗提樣得率為48.17%±2.29%,高效薄層層析分離后磷

5、脂酰膽堿所占比重為22.78%±0.35%。丙酮粗提樣經(jīng)薄層掃描法定量可得每克蝦油中丙酮可溶性磷脂酰膽堿為0.0705 g±0.0016 g。硅膠柱純化丙酮樣品經(jīng)高效液相色譜定性檢測(cè)可得磷脂酰膽堿的純度可以達(dá)到97.77%±0.66%。
　　實(shí)驗(yàn)對(duì)純化后純度達(dá)97.77%±0.66%的磷脂酰膽堿進(jìn)行了紅外光譜分析和脂肪酸分析。從紅外光譜可以看出,該類磷脂酰膽堿與標(biāo)準(zhǔn)品在基本的官能團(tuán)組成上是一致的,差異性主要表現(xiàn)在脂肪酸組成上;脂肪

6、酸分析可知其純化樣品中含有五種脂肪酸,包括棕櫚酸、油酸、7-十六烯酸、EPA和DHA。其中,油酸、7-十六烯酸、EPA和DHA均為不飽和脂肪酸,含量高達(dá)58.75%,而EPA和DHA的含量達(dá)到45.86%。因此,南極磷蝦蝦油中的磷脂酰膽堿是一種可以提供優(yōu)質(zhì)脂肪酸的良好來源,具有重要的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。
　　本實(shí)驗(yàn)從一種新原料——南極磷蝦蝦油中通過兩種途徑分別提取、分離了磷脂酰膽堿。這為高純度磷脂酰膽堿的制備、磷脂酰膽堿的營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)及進(jìn)一步生