奶粉中磷脂酰膽堿分子種類(lèi)檢測(cè)方法的研究.pdf

1、卵磷脂是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。由于卵磷脂適合各個(gè)年齡的人群，尤其是兒童、孕婦和老人，把卵磷脂應(yīng)用到奶粉中，方便人們補(bǔ)充卵磷脂，尤其是對(duì)于飲食單一的兒童，更適合通過(guò)奶粉的渠道補(bǔ)充卵磷脂。因?yàn)槁蚜字谑称分惺且砸环N食品添加劑的形式存在的，噴涂于奶粉時(shí)，卵磷脂的用量要求占奶粉總干物質(zhì)的0.2％-0.3%左右，一般的允許添加量在0.4%以下。所以建立一種靈敏、有效、快速的檢測(cè)奶粉中卵磷脂含量的分析方法對(duì)于保障食品安全具有重要的意義。
　　 現(xiàn)

2、在關(guān)于卵磷脂的研究大多數(shù)都是從大豆或蛋黃中提取出來(lái)，然后進(jìn)行純化，再進(jìn)行檢測(cè)分析，但是大多數(shù)的檢測(cè)方法只能分離開(kāi)磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺等廣義上的卵磷脂，卻不能分開(kāi)狹義上的卵磷脂，也就是磷脂酰膽堿，實(shí)際上，由于甘油磷脂分子的sn-1和sn-2位上是由各種組合的天然脂肪酸酯化而成，所以磷脂酰膽堿一般是代表著一族的分子形式。
　　 文中通過(guò)氣相色譜分析磷脂酰膽堿脂肪酸種類(lèi)的手段建立了超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用檢測(cè)磷脂酰膽堿分子種類(lèi)的方

3、法。通過(guò)兩種不同的甲酯化方法進(jìn)行對(duì)比，用氣相分析，以響應(yīng)值的大小作為參數(shù)，挑選出適合磷脂酰膽堿的方法，用于氣相分析，最后采用堿催化法進(jìn)行甲酯化。
　　 使用質(zhì)譜檢測(cè)器，通過(guò)反復(fù)研究發(fā)現(xiàn)不同的磷脂酰膽堿具有共同的子離子片段，分別為184.1和125，相應(yīng)的碰撞電壓分別為35v利80v，根據(jù)磷脂酰膽堿的結(jié)構(gòu)分析，可知斷裂的兩個(gè)片段都在它的特征基團(tuán)上，是所有的磷脂酰膽堿共有的部分，這一信息為我們檢測(cè)磷脂酰膽堿提供了一個(gè)強(qiáng)有力的依據(jù)，如

4、果這個(gè)推斷成立就能用質(zhì)譜檢測(cè)每一種磷脂酰膽堿分子。采用C18柱，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)分析，試驗(yàn)不同的流動(dòng)相配比，選擇出靈敏度、分離度效果好的流動(dòng)相，最后選擇使用乙腈-甲醇(5:5，v/v)作為流動(dòng)相，進(jìn)行等度洗脫。弱洗液應(yīng)該與流動(dòng)相保持一致，因?yàn)槿跸匆簳?huì)進(jìn)入系統(tǒng)，與流動(dòng)相不同會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。優(yōu)化出的方法能同時(shí)檢測(cè)出混合物的多種組分，并進(jìn)行定性和定量，測(cè)得的結(jié)果線性良好，檢出限為1μg/L，線性范圍10～1000μg/L(R=0.99936)，

5、所有的磷脂酰膽堿的保留時(shí)間都在5min以內(nèi)。
　　 分析研究了高效液相色譜-紫外檢測(cè)的方法，使用C18柱進(jìn)行分析，通過(guò)不同的磷脂酰膽堿的單標(biāo)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)紫外檢測(cè)器無(wú)法將兩種單標(biāo)分離開(kāi)，具有相同的保留時(shí)間，也無(wú)法分離混合的磷脂酰膽堿標(biāo)準(zhǔn)品，改變流動(dòng)相，也不能使之分離，但是HPLC-UV能很好的檢測(cè)出磷脂酰膽堿的總含量，經(jīng)過(guò)研究得到的最適流動(dòng)相為止己烷-異丙醇-水(31/62/7，v/v/v)，波長(zhǎng)為205nm，檢出限為0.1mg/m

6、L，線性范圍0.5～50mg/L(R=0.9967)。
　　 文中還研究了奶粉中磷脂酰膽堿的提取方法，分別選用羅茲法和氯仿-甲醇法提取奶粉中的脂肪，通過(guò)實(shí)驗(yàn)可知，羅茲法和氯仿-甲醇(2:1，v/v)法都適合提取奶粉中的脂肪，得到的脂肪含量基本相同，但是氯仿-甲醇法更適合于高結(jié)合脂含量的樣品，尤其是磷脂含量高的樣品，所以最終選用氯仿-甲醇法。提取的脂肪用丙酮進(jìn)行洗滌，除去其中含有的其他油脂和雜質(zhì)，再用乙醇提取磷脂酰膽堿，近一步純化