氧化低密度脂蛋白在人主動脈平滑肌細胞對腎素(前體)受體表達的影響.pdf

1、動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠狀動脈疾病、腦卒中和周圍動脈疾病等血管性疾病的病理基礎，其特征是脂質(zhì)和纖維成分在動脈壁的不斷積累，而且在慢性炎癥性條件下，可以引發(fā)斑塊破裂和血栓形成的急性臨床事件。對其發(fā)病機制的研究已經(jīng)持續(xù)了數(shù)十年，內(nèi)皮功能障礙是動脈粥樣硬化的始動因素，平滑肌細胞的增殖和遷移是動脈粥樣硬化病理過程中的重要特征。氧化修飾低密度脂蛋白(ox-LDL)是動脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展乃至不穩(wěn)定斑塊形成的關鍵因子

2、，在動脈粥樣硬化中的病理作用已得到公認。ox-LDL作為AS的最重要危險因素之一，主要通過損傷內(nèi)皮細胞、參與泡沫細胞的形成、調(diào)控平滑肌細胞的增殖和引起血小板粘附、聚集等多個方面參與AS的發(fā)生發(fā)展。
　　 高血壓作為另一個重要危險因素，是一個多層面的與心、腦、腎血管異常和功能障礙相關的疾病。腎素血管緊張素系統(tǒng)(reninangiotensinsystem，RAS)在血管炎癥和高血壓的發(fā)展中起著關鍵性作用。腎素（前體）受體[(pro

3、)reninreceptor,(P)RR]作為RAS的新成員之一，近幾年在心血管疾病和腎臟疾病中的重要性受到廣泛的關注。該受體與腎素和腎素前體結合后，可以通過不依賴于傳統(tǒng)的AngⅡ途徑，激活細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導通路，上調(diào)促纖維化基因的表達，最終引起血壓升高，心肌纖維化和腎小球硬化等靶器官損害。
　　 我們課題組前期實驗證實(P)RR存在于人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVECs)中，且可以通過引起內(nèi)皮細胞功能紊亂、炎癥因子表達等機制參與動脈粥樣

4、硬化的發(fā)生和發(fā)展。既往有研究證實在血管平滑肌細胞中亦存在(P)RR的表達，以腎素或腎素前體刺激后，可使ERK1/2磷酸化增強，平滑肌細胞過度增殖，與動脈粥樣硬化相關。而ox-LDL刺激誘導的平滑肌細胞表型轉(zhuǎn)化、異常增殖和遷移至內(nèi)膜下，在動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展中起重要作用，那么ox-LDL在血管平滑肌細胞中對(P)RR的表達是否存在影響，進而參與動脈粥樣硬化的發(fā)生和發(fā)展呢？目前尚無報道。
　　 目的:
　　 研究體外培養(yǎng)的

5、人主動脈平滑肌細胞(humanaorticsmoothmusclecells，HASMCs)中是否存在(P)RR表達及ox-LDL刺激后對(P)RRmRNA及蛋白表達的影響。
　　 方法:
　　 1.體外培養(yǎng)HASMCs。
　　 2.應用免疫熒光技術(Immunofluorescencetechnique)檢測HASMCs中是否存在(P)RR的表達。
　　 3.以100μg/mlox-LDL作為干預終濃度

6、，作用于HASMCs不同的時間，分別設培養(yǎng)1，2，4，6，12和24小時亞組，正常對照組用完全培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時，用Real-timePCR和westernblot方法檢測，確定ox-LDL的刺激時間點并觀察ox-LDL作用不同時間對(P)RRmRNA和蛋白表達的影響。
　　 4.根據(jù)時間組結果，篩選ox-LDL刺激(P)RR表達最強的時間點，用不同濃度ox-LDL作用于HASMCs，分別設25，50，100，150，200，3

7、00μg/ml不同亞組，每亞組分別干預6小時，同樣用Real-timePCR和westernblot方法檢測，觀察不同濃度ox-LDL對(P)RR的mRNA和蛋白表達的影響。
　　 結果:
　　 1.HASMCs中存在(P)RR的表達。
　　 2.100μg/mlox-LDL刺激HASMCs，可上調(diào)(P)RRmRNA和蛋白的表達，在孵育2小時后(P)RR表達開始升高，6小時達到高峰，隨后逐漸下降但仍高于對照組。<

8、br>　　 3.不同濃度ox-LDL刺激HASMCs，與對照組相比，50μg/ml組ox-LDL作用6小時后，可顯著增加(P)RRmRNA和蛋白的表達并且達到峰值，100，150，200，300μg/ml組表達較50μg/ml組無進一步升高趨勢。
　　 結論:
　　 1.HASMCs中存在(P)RR的表達。
　　 2.ox-LDL刺激HASMCs不同時間可使(P)RRmRNA和蛋白表達增多，并且具有一定的時間依