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文檔簡介
1、本文首先對初始菌株棘孢小單孢菌進行復(fù)壯與自然分離,經(jīng)過初篩、復(fù)篩及傳代穩(wěn)定性試驗,得到高產(chǎn)菌株SIPI-GM.13,搖瓶發(fā)酵效價為632μg/mL,比初始菌株的慶大霉素C1a效價444μg/mL提高了1.4倍。緊接著對菌株保藏方法進行考察,并對斜面配方及培養(yǎng)條件進行優(yōu)化,得到最終斜面配方(g/100mL):可溶性淀粉1.5,麩皮3.0,MgSO4·7H200.05,L-天冬酰胺0.002,CaCO30.1,瓊脂條2.0,pH7.0,配制
2、水為飲用水,35℃培養(yǎng)7-8天,培養(yǎng)結(jié)束后放冰箱4℃保藏,7天后傳代。
將SIPI-GM.13作為工藝優(yōu)化的出發(fā)菌株,對初始的種子培養(yǎng)基配方、種子搖瓶培養(yǎng)條件,發(fā)酵培養(yǎng)基配方及其搖瓶培養(yǎng)條件進行了一系列的優(yōu)化,通過試驗得到了最佳的發(fā)酵培養(yǎng)基配方(g/100mL):玉米淀粉4.5,玉米粉1.5,冷榨黃豆餅粉3.2,大豆蛋白胨0.8,KNO30.05,CaCO30.5,CoCl20.002,NaCl0.15, MgSO4·7H2O
3、0.1,(NH4)2SO40.5。并確定了較優(yōu)的培養(yǎng)條件:培養(yǎng)基消前pH8.2、搖瓶裝液量35mL/250mL、接種量11%(4.0mL/35mL)、35℃、240rpm,培養(yǎng)周期為4天。最終發(fā)酵效價為1322μg/mL,比初始的發(fā)酵效價提高了2.9倍。
在對慶大霉素C1a產(chǎn)生菌搖瓶發(fā)酵工藝優(yōu)化的同時,對發(fā)酵液的預(yù)處理方法以及HPLC檢測方法進行了優(yōu)化。通過大量的試驗,最終確定發(fā)酵液的預(yù)處理方法為:用4mol/L硫酸調(diào)pH至1
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