麻痹性貝毒在牡蠣體內(nèi)蓄積、分布、轉(zhuǎn)化以及羧甲基殼聚糖的脫除作用研究.pdf

1、麻痹性貝類毒素(PSP)是一種能夠與神經(jīng)細(xì)胞膜結(jié)合，影響和阻止Na+向細(xì)胞內(nèi)流動(dòng)，從而無(wú)法形成正常的動(dòng)作電位，進(jìn)而抑制神經(jīng)傳導(dǎo)，導(dǎo)致神經(jīng)性麻痹中的神經(jīng)性毒素。PSP主要產(chǎn)自海洋中的單細(xì)胞甲藻，是目前已知海洋有害赤潮藻毒素中引發(fā)毒害事件最頻繁、對(duì)人類影響最嚴(yán)重的一種毒素。濾食性貝類是近海岸主要的大型底棲動(dòng)物，它們能過(guò)濾大量海水并富集有毒藻中的毒素，通過(guò)食物鏈傳遞給人類，每年都有誤食受PSP污染的貝類中毒事件報(bào)道。隨著有害赤潮以及PSP中毒

2、事件頻繁發(fā)生，麻痹性貝類毒素污染已成為世界關(guān)注的焦點(diǎn)。
　　本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)產(chǎn)毒微小亞歷山大藻(A.minutum)，對(duì)我國(guó)沿海地帶養(yǎng)殖的主要經(jīng)濟(jì)貝類——近江牡蠣進(jìn)行人工染毒實(shí)驗(yàn)；以小鼠生物法、熒光法、HPLC-FLD法等作為檢測(cè)手段，研究 PSP在牡蠣體內(nèi)的蓄積、分布、排出以及轉(zhuǎn)化規(guī)律，重點(diǎn)考查羧甲基殼聚糖對(duì)牡蠣體內(nèi)PSP脫除效果，對(duì)其脫除機(jī)理進(jìn)行初步探索。主要結(jié)果如下：
　　(1)采用不同初始密度(0.05×104、0

3、.1×104、0.15×104、0.3×104cells/mL)以及不同培養(yǎng)方式（培養(yǎng)箱、室外）培養(yǎng)微小亞歷山大藻，研究微小亞歷山大藻生長(zhǎng)以及產(chǎn)毒規(guī)律。結(jié)果表明：隨著初始密度增加藻細(xì)胞通過(guò)靜止期時(shí)間縮短，到達(dá)最大生長(zhǎng)密度時(shí)間提前；培養(yǎng)箱和室外培養(yǎng)方式下微小亞歷山大藻都可以正常生長(zhǎng)，而且毒素組成相同，都含有 GTX1/2/3/4，但是毒素相對(duì)含量存在差異，培養(yǎng)箱錐形瓶培養(yǎng)的藻細(xì)胞毒素含量為25.28 fmol/cell低于室外廣口瓶(30

4、.60fmol/cell)。綜合考慮微小亞歷山大藻的生長(zhǎng)周期、最大生長(zhǎng)密度以及產(chǎn)毒能力，在室外廣口瓶中接種密度為0.1~0.15×104 cells/mL微小亞歷山大藻能夠達(dá)到較好的產(chǎn)毒效果，從而滿足毒素提取和投喂牡蠣的實(shí)驗(yàn)需要。
　　(2)以不同密度(0.5~3×103 cells/mL)微小亞歷山大藻短期投喂牡蠣，獲得牡蠣最佳濾食濃度為0.5~1.5×103cells/mL，在此基礎(chǔ)上每天投喂兩次微小亞歷山大藻，共進(jìn)行5天毒素

5、蓄積實(shí)驗(yàn)，研究牡蠣對(duì)PSP的蓄積、分布以及轉(zhuǎn)化規(guī)律，結(jié)果表明：長(zhǎng)期投喂微小亞歷山大藻過(guò)程中，有毒藻對(duì)牡蠣濾食能力沒(méi)有顯著影響，這導(dǎo)致牡蠣在短期內(nèi)蓄積大量毒素，在毒素蓄積的最后一天牡蠣體內(nèi)毒性水平達(dá)3069.2±178.2MU/100g，高于國(guó)家限量標(biāo)準(zhǔn)(400MU/100g)的7.7倍；毒素在牡蠣體內(nèi)的分布具有組織差異性，內(nèi)臟是蓄積PSP的主要部位，蓄積了87％的毒素，其次是外套膜+鰓(11%)，肌肉中蓄積的毒素最少(2%)；牡蠣體內(nèi)P

6、SP組成與產(chǎn)毒微小亞歷山大藻毒素組成存在差異，PSP在牡蠣體內(nèi)主要發(fā)生GTX2→dcGTX2轉(zhuǎn)化。
　　(3)采用扁藻混合羧甲基殼聚糖、扁藻、饑餓三種凈化方式對(duì)牡蠣進(jìn)行PSP脫除實(shí)驗(yàn)，研究脫毒過(guò)程中牡蠣內(nèi)臟、外套膜+鰓以及肌肉中PSP排出以及轉(zhuǎn)化規(guī)律，結(jié)果表明：牡蠣所有組織中的PSP都隨著凈化時(shí)間的延長(zhǎng)逐漸減少，內(nèi)臟中毒素排出速率最快，最大排出速率為0.26d-1，肌肉中毒素排出速率最慢(0.06d-1)；與饑餓喂養(yǎng)方式相比添加羧

7、甲基殼聚糖可以提高牡蠣各個(gè)組織中毒素排出速率；毒素主要以GTX1/4形式排出體外，添加羧甲基殼聚糖可以有效降低牡蠣中STX含量，PSP在排出過(guò)程發(fā)生了生物轉(zhuǎn)化，主要表現(xiàn)為 GTX1/4→GTX2/3、GTX2/3→STX、GTX2→dcGTX2。
　　(4)采用pH為7.2的磷酸鹽緩沖液能夠有效提取牡蠣中可溶性各組分PSP，其中牡蠣內(nèi)臟和外套膜+鰓中PSP主要以小分子(0~3500Da)形式存在，而肌肉中毒素主要以大分子形(>35