克拉維酸高產(chǎn)菌株的篩選及發(fā)酵條件的優(yōu)化.pdf

1、　　本實(shí)驗(yàn)以棒狀鏈霉菌為出發(fā)菌株，利用途徑工程原理對(duì)其基因組進(jìn)行定向改造。本研究選取頭霉素C的早期合成基因lat為目標(biāo)基因，構(gòu)建了基因置換載體pXAL1，對(duì)棒狀鏈霉菌進(jìn)行l(wèi)at的定域基因置換，通過(guò)檢測(cè)賴(lài)氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性和Southern雜交結(jié)果分析，得知lat基因被中斷，篩選得到一株雙交換菌株，命名為XAL863。發(fā)酵結(jié)果表明，其產(chǎn)克拉維酸的能力約為原始菌株的2倍。且菌株具有遺傳穩(wěn)定性?！　〗酉聛?lái)，本實(shí)驗(yàn)探討了基因改造菌株適合的生長(zhǎng)條件

2、，對(duì)C源，N源，復(fù)合C源及C源和N源的最佳比值進(jìn)行了優(yōu)化實(shí)驗(yàn)，選擇了甘油和糊精為復(fù)合C源，其摩爾比為1：1；選擇大豆餅粉為N源，N源和C源的最佳比值為摩爾比4：1。本實(shí)驗(yàn)還探討了消泡劑和磷對(duì)克拉維酸產(chǎn)量的影響，得到了在用30g/l大豆粉作為碳源的培養(yǎng)基中，加入0.2g/l的CaCl2更有利于克拉維酸積累的結(jié)論。在進(jìn)行一系列培養(yǎng)基優(yōu)化實(shí)驗(yàn)后，確定較為理想的培養(yǎng)基成分為大豆粉、甘油、糊精、CaCl2和MgSO4.7H2O含量分別為32g/l