空腸彎曲菌流行病學(xué)及在雞肉低溫貯藏過程中失活動(dòng)力學(xué)特征研究.pdf

1、空腸彎曲菌是全球范圍內(nèi)主要的細(xì)菌性腸道病原菌。近年來許多國(guó)家人空腸彎曲菌病的發(fā)生率呈指數(shù)增長(zhǎng)趨勢(shì)，但其中的原因尚未揭示。雖然空腸彎曲菌有多種傳播途徑，但是消費(fèi)雞肉被認(rèn)為與人感染彎曲菌密切相關(guān)。降低雞肉中空腸彎曲菌的感染量是控制人彎曲菌病的主要途徑。此外，由于空腸彎曲菌耐藥性的不斷出現(xiàn)，食品安全和食源性疾病的問題已日益突出，成為公共衛(wèi)生關(guān)注的新焦點(diǎn)。本研究的目的是：(1)對(duì)醫(yī)院腹瀉人群、食品從業(yè)健康人群、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)食物、寵物群體彎曲菌的感染

2、流行狀況進(jìn)行初步調(diào)查研究；(2)應(yīng)用國(guó)標(biāo)方法鑒定分離株的生化特性，并應(yīng)用2007年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴(kuò)散法進(jìn)行耐藥分析；(3)對(duì)低溫貯藏過程中彎曲菌在雞肉表面的失活動(dòng)力學(xué)特征進(jìn)行初步研究。 一、空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的流行病學(xué)調(diào)查 自2007年1月至2008年12月采集揚(yáng)州市區(qū)2所醫(yī)院腹瀉人群的糞便樣品2，758份，揚(yáng)州市疾病預(yù)防控制中心健康體檢人群的肛拭樣品2，771份，揚(yáng)州市區(qū)四個(gè)主

3、要農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)食品樣本1，149份，揚(yáng)州和上海地區(qū)寵物門診以及飼養(yǎng)場(chǎng)的寵物肛拭樣品510份。以國(guó)標(biāo)法為參照，采用增菌培養(yǎng)、選擇性培養(yǎng)和多重PCR鑒定方法對(duì)上述樣品進(jìn)行空腸彎曲菌和結(jié)腸彎曲菌的分離鑒定。結(jié)果顯示，醫(yī)院糞便樣品中，空腸彎曲菌陽性率為4.5％(124/2，758)，結(jié)腸彎曲菌陽性率為0.4％(11/2，758)。本室4年的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)表明，不同醫(yī)院的感染率差異不顯著(p>0.05)，門診部的感染率極顯著高于住院部的(p<0.01)，6

4、月-10月份的感染率顯著高于11月-2月和3月-5月的感染率(p<0.05)。食品從業(yè)健康人群的樣品中，空腸彎曲菌陽性0.14％(4/2，771)。腹瀉人群感染率極顯著高于健康人群(P<0.01)。農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)食品樣本中，空腸彎曲菌陽性率為1.91％(22/1，149)，結(jié)腸彎曲菌陽性率為1.22％(14/1，149)。寵物犬門診樣本中，空腸彎曲菌陽性率為5.36％(18/336)，結(jié)腸彎曲菌陽性率為1.79％(6/336)。寵物飼養(yǎng)基地以

5、及犬防樣品中，空腸彎曲菌陽性陽性率為1.75％(3/174)。從以上結(jié)果可以看出，空腸彎曲菌是引起腹瀉的重要的病原。寵物犬和食品是空腸彎曲菌感染人的重要途徑。加強(qiáng)對(duì)寵物源、食品源彎曲菌的控制，有助于預(yù)防和控制彎曲 二、彎曲菌分離株的耐藥性分析 采用國(guó)標(biāo)方法和2007年美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)推薦使用的瓊脂擴(kuò)散法對(duì)96株人源空腸彎曲菌、22株市場(chǎng)源空腸彎曲菌、15株寵物源空腸彎曲菌，以及21株結(jié)腸彎曲菌的耐藥

6、性進(jìn)行了研究。 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，133株空腸彎曲菌對(duì)8大類21種抗生素高度敏感的是：頭孢噻肟96.24％、慶大霉素94.74％、紅霉素92.48％、阿齊紅霉素91.73％、阿莫西林85.71％，高度耐藥的是：頭孢哌酮100％、頭孢拉定97.74％、萘啶酸90.23％、頭孢克羅90.22％、復(fù)方新諾明87.97％、環(huán)丙沙星87.22％、諾氟沙星85.71％、左旋氧氟沙星84.36％、恩諾沙星84.96％、四環(huán)素82.70％。耐藥

7、菌株的多重耐藥分布于2耐到17耐不等，主要集中在8耐到14耐，占87.22％。 21株結(jié)腸彎曲菌對(duì)臨床常用的抗生素高度敏感的是：頭孢噻肟95.24％、阿莫西林85.72％、紅霉素85.72％、阿齊紅霉素90.48％、克林霉素80.95％;高度耐藥的是：頭孢拉定100％、恩諾沙星100％、頭孢哌酮100％、左旋氧氟沙星100％，萘定酮酸100％、復(fù)方新諾明100％、強(qiáng)力霉素100％、環(huán)丙沙星95.24％、四環(huán)素95.24％、頭孢克

8、羅95.24％、諾氟沙星90.48％、土霉素85.72％、青霉素80.95％。其中多重耐藥菌株主要分布在11耐、14耐和17耐。 藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，133株不同來源的空腸彎曲菌只對(duì)氨基糖甙類和大環(huán)內(nèi)脂類抗生素較為敏感，對(duì)喹諾酮類、磺胺類、四環(huán)素類和大多數(shù)頭孢菌素類抗生素均產(chǎn)生了不同程度的耐藥性。不同來源空腸彎曲菌的多重耐藥的現(xiàn)象十分嚴(yán)重，耐藥譜也較寬，其中市場(chǎng)來源的菌株耐藥譜最寬。而人源菌株與寵物犬菌株的耐藥譜較為接近，這可能與

9、兩者接觸更為頻繁有關(guān)。必須加強(qiáng)各地彎曲菌耐藥性和抗生素使用情況的監(jiān)測(cè)，及時(shí)調(diào)整用藥方案和公共衛(wèi)生策略。 三、空腸彎曲菌在雞肉低溫貯藏過程中的失活動(dòng)力學(xué)特征 空腸彎曲菌對(duì)低溫較為敏感，低溫貯藏是降低雞肉表面彎曲菌數(shù)量較為有效的措施之一。為了了解空腸彎曲菌在雞肉低溫貯藏過程中的失活動(dòng)力學(xué)特征，并為雞肉產(chǎn)品中彎曲菌的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供有力數(shù)據(jù)。為此研究了-20℃、4℃低溫貯藏溫度條件下三株空腸彎曲菌(ATCC33560，JR0706

10、-2，ALM-80)在雞肉表面的失活動(dòng)力學(xué)特征。結(jié)果表明：-20℃溫度條件下在55d貯藏期內(nèi)雞肉樣品中3株空腸彎曲菌的殘活細(xì)胞數(shù)分別降低了3.16，2.87，3.14 logCFU/g。殘活率在冷凍起始20d內(nèi)，呈現(xiàn)緩慢下降趨勢(shì)；20d至45d的下降速度較快；接著在45天至55天的下降速度放緩。4℃溫度條件下在10d貯藏期內(nèi)雞肉樣品中3株空腸彎曲菌的殘活細(xì)胞數(shù)分別降低了3.47，3.35，3.51logCFU/g。平均失活率分別為0.3

11、471gCFU/d，0.355lgCFU/d，0.439LgCFU/d。不同的空腸彎曲菌菌株在-20℃和4℃低溫貯藏過程中殘活率的對(duì)數(shù)值下降幅度存在差別，但三株細(xì)菌之間殘活率變化趨勢(shì)沒有顯著區(qū)別(P>0.05)。應(yīng)用軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行擬合，結(jié)果表明所得到的失活動(dòng)力學(xué)方程與實(shí)際觀測(cè)值吻合度較高。 冷鏈在雞肉產(chǎn)品的銷售過程中起到至關(guān)重要的作用，然而在實(shí)際生產(chǎn)生活中雞肉產(chǎn)品往往會(huì)有一段時(shí)間處在冷鏈系統(tǒng)之外，存在反復(fù)凍融的情況。為了研究

12、反復(fù)凍融對(duì)雞肉表面彎曲菌的活力的影響，我們進(jìn)行了8次凍融實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明：空腸彎曲的殘活細(xì)胞數(shù)降低了2.758 logCFU/g。細(xì)菌的殘活曲線呈現(xiàn)先快后慢的下降趨勢(shì)。第1到5次的凍融操作過程中，平均失活率為0.43210gCFU/次。第6到8次凍融過程中平均失活率為0.07logCFU/次。說明反復(fù)凍融的操作可以起到降低雞肉表面空腸彎曲菌數(shù)量的效果。 為了研究在冷鏈系統(tǒng)之外雞肉表面空腸彎曲菌的數(shù)量變化，在凍融試驗(yàn)中預(yù)設(shè)了三個(gè)“事

13、故點(diǎn)”，模擬冷鏈?zhǔn)?，6，12小時(shí)后雞肉表面空腸彎曲菌數(shù)量在不同外界溫度環(huán)境下的變化規(guī)律。在前兩個(gè)“事故點(diǎn)”(第一、二次凍融實(shí)驗(yàn))O℃和25℃環(huán)境溫度下，雞肉表面空腸彎曲菌存活細(xì)胞數(shù)沒有顯著的變化：37℃環(huán)境溫度下，細(xì)菌呈現(xiàn)緩慢增殖。在第三個(gè)“事故點(diǎn)”(第三次凍融實(shí)驗(yàn))0℃和25℃環(huán)境溫度下，雞肉表面空腸彎曲菌存活細(xì)胞數(shù)呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，而37℃環(huán)境溫度下，細(xì)菌數(shù)量保持穩(wěn)定。說明冷鏈?zhǔn)欠乐闺u肉表面彎曲菌增殖較為行之有效的方法。 把