炎癥介導(dǎo)的CXCL16-CXCR6途徑激活在脂質(zhì)肝損傷中的作用研究.pdf

1、目的：肝臟是脂代謝的核心器官，脂代謝紊亂在肝損傷中扮演重要作用。非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是一種常見的、病理上以肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及炎癥為主要特點(diǎn)的疾病，目前被認(rèn)為是代謝綜合征在肝臟的主要表現(xiàn)。本研究旨在探討微炎癥狀態(tài)下細(xì)胞因子(C-X-C motif)配體16(CXC ligand16，CXCL16)及其受體CXC受體6(CXC chemokine recepto

2、r6，CXCR6)在NAFLD發(fā)生、發(fā)展中的作用及機(jī)制。
　　方法：研究分為體內(nèi)、體外兩部分。將8周齡雄性載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E knockout，ApoE KO)小鼠隨機(jī)分為對照組，高脂組，高脂+炎癥組。8周后處死小鼠，收集血漿標(biāo)本及肝臟組織。體外研究，應(yīng)用膽固醇(cholesterol，CHO)、白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)或CXCL16siRNA干預(yù)人肝細(xì)胞株(Hum

3、anhepatoblastoma cell line，HepG2)。采用化學(xué)酶法及ELISA法分別檢測脂質(zhì)譜及炎癥因子水平，蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin-eosin staining，HE)、油紅O染色及Filipin染色觀察胞內(nèi)脂質(zhì)積聚情況。免疫組化、免疫熒光染色、Real-time PCR及Western Blot法檢測組織及細(xì)胞內(nèi)炎癥因子、CXCL16/CXCR6信號通路相關(guān)蛋白以及胞外基質(zhì)(extracellular

4、 matrix，ECM)的表達(dá)情況，并采用流式細(xì)胞儀法對活性氧簇(reactiveoxygen species，ROS)進(jìn)行定量測定。
　　結(jié)果：與高脂組相比，高脂+炎癥組血清中炎癥因子血清淀粉樣蛋白A(serumamyloid proteinA，SAA)、肝細(xì)胞內(nèi)腫瘤壞死因子(tumor necrosis factor，TNF-α)及單核細(xì)胞趨化蛋白-1(monocyte chemotactic protein1，MCP-1)表

5、達(dá)明顯增加，提示微炎癥動物模型構(gòu)建成功，且高脂+炎癥組除HDL外，其他脂質(zhì)成分顯著降低。進(jìn)一步研究顯示，炎癥顯著增加肝細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)沉積及上調(diào)CXCL16/CXCR6信號通路相關(guān)蛋白的表達(dá)，并伴有胞外基質(zhì)及氧化產(chǎn)物ROS的合成增加。有趣的是，體外應(yīng)用CXCL16siRNA基因沉默HepG2細(xì)胞CXCL16的表達(dá)，則脂質(zhì)沉積、胞外基質(zhì)以及ROS的含量明顯減少。
　　結(jié)論：本研究證實(shí)，炎癥可能通過激活CXCL16/CXCR6信號途徑誘導(dǎo)胞