膠質(zhì)細胞α7-nAChR激活在削弱Aβ介導的神經(jīng)干細胞失能中作用的研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學2010級碩士學位論文膠質(zhì)細胞a7nAChR激活在削弱Ap介導的神經(jīng)干細胞失能中作用的研究Thestudyofactivatedgliala7一nAChRontheinhibitionof13amyloidmediatedneuralstemcelldisability課題來源：國家自然科學基金(30973162)廣東省自然科學基金(07005203)學位申請人導師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學院朱寧王勇教授藥劑學學術型

2、碩士第二臨床醫(yī)學院年月日廣州摘要形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞都存在a7nAChR的表達，其主要功能是實現(xiàn)膽堿能神經(jīng)遞質(zhì)的信號傳遞。巨噬細胞a7一nAChR激活后降低了炎性介質(zhì)的表達和釋放，小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞與巨噬細胞在炎性反應中功能相似，膠質(zhì)細胞it7一nAChR激活后炎性介質(zhì)的分泌可能也會減少。在本研究中，我們用transwell板建立膠質(zhì)細胞與神經(jīng)干細胞的體外共培養(yǎng)體系，神經(jīng)干細胞和膠質(zhì)細胞分別培養(yǎng)在transwell板的上層和下層

3、，通過在下層的膠質(zhì)細胞中加入AB模擬AD炎性微環(huán)境，并經(jīng)液相芯片技術檢測細胞因子和趨化因子的表達，流式細胞術檢測神經(jīng)干細胞的凋亡，探討A13刺激膠質(zhì)細胞產(chǎn)生的炎癥反應對神經(jīng)千細胞的影響。通過加入尼吉丁激活膠質(zhì)細胞a7nAChR，研究膠質(zhì)細胞a7nAChR激活后對炎性反應的抑制及對神經(jīng)干細胞的保護作用。在體外研究的基礎上，我們通過立體定位技術注射Ap到大鼠海馬中，A13刺激膠質(zhì)細胞分泌炎性因子，借此構建AD炎性模型，并通過皮下注射尼古丁方

4、式激活膠質(zhì)細胞a7nAChR。BrdU(Bromodeoxyuridine，BrdU)標記后的外源性神經(jīng)干細胞經(jīng)立體定位技術注入海馬內(nèi)，經(jīng)免疫熒光雙染技術檢測外源性神經(jīng)干細胞在體內(nèi)的增殖和分化情況，明確膠質(zhì)細胞a7nAChR激活后對神經(jīng)干細胞增殖分化的影響。方法1海馬NSCs培養(yǎng)及鑒定出生24hSD大鼠置于75％酒精中浸泡消毒30s。無菌條件下斷頭耿全腦置于冰PBS中，分離出海馬組織，移液槍輕輕吹打開海馬組織。胰蛋白酶消化，置細胞培養(yǎng)箱