SIRT3在小膠質(zhì)細(xì)胞激活致神經(jīng)干細(xì)胞失能中的作用研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)9_013級博士學(xué)位論文SIRT3在小膠質(zhì)細(xì)胞激活致神經(jīng)干細(xì)胞失能中的作用研究TheeffectsofSIRT3inneuralstemcellsondysfunction●●●1●●●●●inducedbVmlcrogllaactwa，t10n課題來源：國家自然科學(xué)基金(No81302738)廣東省自然科學(xué)基金(No$2013010015546)學(xué)位申請人導(dǎo)師姓名專業(yè)名稱培養(yǎng)類型培養(yǎng)層次所在學(xué)院答辯委員會主席答辯委員會成員

2、蔣德旗王勇教授藥理學(xué)學(xué)術(shù)型博士藥學(xué)院劉叔文教授吳忠教授張軍教授陳吉生主任藥師周本杰主任藥師2016年5月16日廣州摘要增加rt202誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激死亡，SIRT3基因缺失還加劇PD模型小鼠黑質(zhì)紋狀體多巴胺能神經(jīng)元的退化。SIRT3在神經(jīng)疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮一定作用，但尚未見神經(jīng)干細(xì)胞SIRT3與神經(jīng)再生的相關(guān)研究報道。課題組前期研究證實(shí)小膠質(zhì)細(xì)胞激活產(chǎn)生的炎性損傷誘導(dǎo)NSC凋亡，抑制其分化為神經(jīng)元，并與能量代謝有關(guān)。在此基礎(chǔ)上，我們推測，

3、SIRT3可能通過減輕氧化應(yīng)激和炎癥損傷、改善線粒體功能等，在小膠質(zhì)細(xì)胞激活致NSC失能過程中發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用，促進(jìn)神經(jīng)再生。本課題研究可望為揭示神經(jīng)炎癥介導(dǎo)NSC失能的機(jī)制提供新觀點(diǎn)，為AD等神經(jīng)退行性疾病臨床治療和藥物干預(yù)提供新靶點(diǎn)。目的研究SIRT3在小膠質(zhì)細(xì)胞激活致NSC失能中的作用，探討SIRT3基因過表達(dá)和干擾對NSC凋亡、增殖、分化、線粒體功能、ROS生成等生命活動的影響及相關(guān)分子機(jī)制。方法本研究采用Tanswell系統(tǒng)共

4、培養(yǎng)小鼠神經(jīng)干細(xì)胞系C172(NSC)和小膠質(zhì)細(xì)胞BV2(MG)，C172細(xì)胞貼壁培養(yǎng)在下室，BV2貼壁培養(yǎng)在上室。共培養(yǎng)系統(tǒng)中添加10gMA13作用于兩種細(xì)胞，BV2細(xì)胞被激活，建立小膠質(zhì)細(xì)胞激活致神經(jīng)干細(xì)胞失能的細(xì)胞共培養(yǎng)模型。SIRT3基因過表達(dá)和干擾模型的建立：C172細(xì)胞與BV2細(xì)胞共培養(yǎng)前，C172接種在細(xì)胞培養(yǎng)六孔板的底部，當(dāng)匯合度約為40％50％時，過表達(dá)模型添加SIRT3過表達(dá)腺病毒，干擾模型添加SIRT3siRNA，

5、細(xì)胞均無血清培養(yǎng)轉(zhuǎn)染6h；而BV2細(xì)胞接種在另～個嵌套有Transwell裝置六孔板的上室底部，使BV2細(xì)胞匯合度在C172細(xì)胞病毒或siRNA轉(zhuǎn)染完時達(dá)到50％～60％左右；當(dāng)C172轉(zhuǎn)染完后，將貼壁培養(yǎng)BV2細(xì)胞的Transwell嵌套裝置移至底部貼壁培養(yǎng)有C172細(xì)胞的六孔板中，并添加10gMA13作用于BV2和C172細(xì)胞。利用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)鑒定C172一NSC標(biāo)記物nestin、并檢測SIRT3的蛋白表達(dá)。采用ELISA和分