Rho激酶在凝血酶誘導的小膠質細胞激活中作用的研究.pdf

1、目的：通過觀察凝血酶(Thrombin)、凝血酶抑制劑阿加曲班、Rho激酶抑制劑Y-27632對新生鼠皮層小膠質細胞Rho激酶表達的影響以及其對于小膠質細胞的激活作用，探討Rho激酶在凝血酶誘導小膠質細胞激活中的作用機制。
　　 方法：1．將體外培養(yǎng)的新生SD大鼠(3天內)大腦皮層小膠質細胞隨機分為對照組和凝血酶組，并按照凝血酶的不同濃度，又將凝血酶組分10U/ml,20U/ml，40U/ml,60U/ml四個亞組，作用6小時后

2、，應用western-blot技術觀察不同組別小膠質細胞Rho激酶的表達情況。2．將小膠質細胞隨機分為對照組和凝血酶組(20U/ml)，并按照凝血酶(20U/ml)的不同作用時間隨機分為3小時，6小時，12小時，24小時四個亞組，應用western-blot技術觀察不同組別小膠質細胞Rho激酶的表達情況。3．將小膠質細胞隨機分為對照組和凝血酶(20U/ml，24小時)組，然后按照同濃度、同時間(20U/ml，24小時)的實驗條件，將凝血

3、酶組分為Thrombin、阿加曲班、Y-27632三個亞組，其中阿加曲班、Y-27632組分別為阿加曲班和Y-27632預處理半小時后再與凝血酶共孵育24小時，然后用免疫熒光和western-blot技術觀察不同組別小膠質細胞Rho激酶的表達情況，通過顯微鏡觀察小膠質細胞的形態(tài)，硝酸還原酶法和ELISA法檢測各組培養(yǎng)基中一氧化氮(NO)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)的表達情況，以激光共聚焦，中性紅吞噬實驗檢測小膠質細胞的吞噬能力。將以

4、上結果進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果：1．與對照組相比，不同濃度凝血酶與小膠質細胞共孵育后，濃度在20U/ml時，小膠質細胞Rho激酶表達顯著增加(P＜0.05)。2．與對照組相比，凝血酶在作用24小時后，小膠質細胞Rho激酶表達顯著增加(P＜0.05)。3．與對照組相比，凝血酶在濃度20U/ml，作用24小時時，Rho激酶表達顯著增加且NO和TNF-α的表達量顯著增加(P＜0.05)，吞噬能力增強(P＜0.05)；與凝血酶組(2