粗糙脈孢菌糖轉(zhuǎn)運蛋白功能及產(chǎn)酶條件優(yōu)化研究.pdf

1、本論文對粗糙脈孢菌（Neurosporacrassa）進行了兩方面的研究工作。一部分是三個纖維二糖轉(zhuǎn)運蛋白基因的研究，另一部分是對產(chǎn)酶培養(yǎng)基優(yōu)化的研究。
　　微生物將生物質(zhì)降解為各種糖類物質(zhì)，這些糖類物質(zhì)通過糖轉(zhuǎn)運蛋白運送到細胞中，并在細胞中進行進一步的代謝。在自然界中，糖轉(zhuǎn)運蛋白對于碳水化合物的代謝起著至關(guān)重要的作用。在非葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白的研究中，纖維二糖轉(zhuǎn)運蛋白的研究非常少見。粗糙脈胞菌具有纖維素降解，乙醇發(fā)酵，木糖應(yīng)用等杰出特

2、點，是一個非常有工業(yè)應(yīng)用潛力的絲狀真菌。2010年，有科學(xué)家首次從粗糙脈孢菌中克隆鑒定了纖維二糖轉(zhuǎn)運蛋白基因CDT1、CDT2。但是對其生理生化功能、基因表達調(diào)控等分子機理還不很了解。
　　本論文以三個纖維二糖轉(zhuǎn)運蛋白為研究對象，分別為CDT1、CDT2和CDT3。實驗中構(gòu)建并獲得了三個基因的單敲除體菌株，雙敲除體菌株及三敲除體菌株。并且在不同碳源培養(yǎng)基中生長這些菌株，通過纖維素內(nèi)切酶酶活，木聚糖酶酶活等指標(biāo)反映各個菌株之間的生長

3、差異。結(jié)果表明，在以纖維二糖為碳源的培養(yǎng)基中生長的三敲除體菌株T123生長較雙突變菌株D12差，說明CDT3基因與纖維二糖轉(zhuǎn)運相關(guān)。并通過綠色熒光蛋白GFP對糖轉(zhuǎn)運蛋白進行了定位。定位結(jié)果顯示，糖轉(zhuǎn)運蛋白均在各種膜上進行表達。
　　本論文第二部分是以粗糙脈孢茵基因組測序菌株FGSC2489為對象，采用響應(yīng)面分析法對粗糙脈孢菌搖瓶發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的培養(yǎng)基進行優(yōu)化。在初始培養(yǎng)基的基礎(chǔ)上，采用該優(yōu)化培養(yǎng)基，最大纖維素酶活可達:1.27FP