粉紅粘帚霉基因在黑曲霉中的表達(dá)及酶學(xué)性質(zhì).pdf

1、淀粉和纖維素是自然界中最廉價(jià)、最豐富的可再生資源，糖化酶和內(nèi)切葡聚糖酶是降解它們最關(guān)鍵的酶類。為了利用豐富的淀粉和纖維素資源，就必須獲得性質(zhì)優(yōu)良的糖化酶和內(nèi)切葡聚糖酶。真菌來源的糖化酶和內(nèi)切葡聚糖酶是目前淀粉酶和纖維素酶研究的主要部分。過氧化氫酶是一種重要的工業(yè)酶制劑，它能催化分解過氧化氫生成水和氧氣，在食品、醫(yī)藥，紡織等行業(yè)具有廣泛的應(yīng)用潛力。因此，開發(fā)出真菌來源的新型過氧化氫酶具有重要的研究?jī)r(jià)值。
　　本實(shí)驗(yàn)室（蛋白質(zhì)表達(dá)及分

2、子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室）前期對(duì)粉紅粘帚霉菌全基因組進(jìn)行了測(cè)序，獲得了粉紅粘帚霉全基因組的序列信息，進(jìn)而為新型酶基因的研究奠定了基礎(chǔ)。本研究通過采用氨基酸序列比對(duì)方式，并結(jié)合相關(guān)序列的功能注釋信息，從粉紅粘帚霉全基因組中挖掘到了5個(gè)相關(guān)酶的基因（糖化酶基因g3440，內(nèi)切葡聚糖酶基因45家族g8456和g1028，內(nèi)切葡聚糖酶基因5家族g204，過氧化氫酶基因g2092）。為了實(shí)現(xiàn)分泌型表達(dá)，對(duì)各基因編碼氨基酸的序列進(jìn)行了信號(hào)肽檢測(cè)，證實(shí)了5個(gè)基

3、因的氨基酸序列均含有信號(hào)肽。本實(shí)驗(yàn)采用基因工程技術(shù)手段，構(gòu)建了5個(gè)基因的pGm重組質(zhì)粒，并將其分別轉(zhuǎn)化黑曲霉G1進(jìn)行重組表達(dá)。獲得了三個(gè)基因的成功表達(dá)，其分別是:糖化酶基因g3440，內(nèi)切葡聚糖酶基因g1028，過氧化氫酶基因g2092。測(cè)定了三種酶粗酶液的活性及相關(guān)酶的性質(zhì)，結(jié)果表明:糖化酶活性達(dá)292.85U/mL，最適溫度和pH分別為50℃和5.0，該酶的耐熱性較差，pH穩(wěn)定性較好;內(nèi)切葡聚糖酶活性達(dá)218.17U/mL，最適溫度