膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的建立.pdf

1、目的:研究膽堿酯酶催化活性濃度測量方法的影響因素,建立膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法。
　　方法:⑴收集近20年國內(nèi)外膽堿酯酶測量方法,按膽堿酯酶質(zhì)量和酶催化活性濃度二類膽堿酯酶被測量將其測量方法分類,根據(jù)測量方法標(biāo)準(zhǔn)化、自動化的可行性、試劑來源與成本等條件篩選膽堿酯酶測量參考方法的被測量。⑵按膽堿酯酶測量原理將收集的測量方法分類,根據(jù)膽堿酯酶測量方法的優(yōu)越性、測量方法的市場占有率、各測量方法的試劑來源及成本等因素選擇適宜的膽堿

2、酯酶測量原理,并以此原理篩選目前市售膽堿酯酶試劑盒,進(jìn)行測量精密度與線性的評價,初步確定膽堿酯酶測量參考方法的測量原理。⑶根據(jù)酶學(xué)測量的基礎(chǔ)理論、酶學(xué)測量參考方法的研究現(xiàn)狀、膽堿酯酶催化活性濃度測量的原理和特點(diǎn),確定影響膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的測量因素及其最適測量條件。⑷應(yīng)用經(jīng)典的單因素分析法,選擇影響膽堿酯酶催化活性濃度測量的試劑因素及其最適測量條件。⑸應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化膽堿酯酶測量參考方法的關(guān)鍵影響因素的測量條件。⑹通過

3、實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證響應(yīng)面分析法確定的各關(guān)鍵影響因素最佳測量條件的合理性。
　　結(jié)果:⑴膽堿酯酶測量參考方法的被測量為膽堿酯酶催化活性濃度。⑵膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的測量原理為:丁酰硫代膽堿/DTNB法。⑶膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的測量因素及最適測量條件為:測量溫度37℃、光徑1cm、檢測波長405nm、摩爾吸光系數(shù)13300LM-1cm-1、帶寬2nm、樣本體積比1:251(0.0040)、延遲時間60s、測量時間90s。

4、⑷采用單因素分析法確定膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的試劑因素及其測量條件為:丁酰硫代膽堿濃度1.48m mol/L、DTN B濃度0.3m mol/L、緩沖液pH值8.0。⑸應(yīng)用響應(yīng)面分析法優(yōu)化膽堿酯酶催化活性濃度測量參考方法的關(guān)鍵影響因素的測量條件為:丁酰硫代膽堿濃度13.4 mmol/L、DTNB濃度0.29 mmol/L、緩沖液pH8.1。⑹以膽堿酯酶測量參考方法最適測量條件檢測臨床血清樣本催化活性濃度值為8755U/L,為響