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文檔簡介
1、目的:研究高糖記憶對人系膜細胞(HMCs)表達局部醛固酮系統(tǒng)、活性氧(ROS)及癌胚纖維連接蛋白(oncofetal FN)mRNA水平的影響,并進一步探討局部醛固酮系統(tǒng)在其中的作用。
方法:實驗細胞分組如下:正糖組(NG,5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天)、高糖組(HG,25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天)、記憶組(M,25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)4天)、記憶+依普利酮組(
2、MY,25 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮培養(yǎng)4天)、正糖+依普利酮組(NY,5 mmol/L D-葡萄糖培養(yǎng)2天→5 mmol/L D-葡萄糖+10μmol/L依普利酮培養(yǎng)4天)、持續(xù)正糖組(SN,5mmol/L D.葡萄糖培養(yǎng)6天)。以RT-PCR法檢測醛固酮合酶(CYP1182)、11β-羥基類固醇脫氫酶Ⅱ(11βHSD2)、ontofetal FNmRNA表達水平,Wes
3、tern-blot檢測CYP1182蛋白表達水平,放射免疫法分析細胞培養(yǎng)液醛固酮水平,激光共聚焦顯微鏡(LSCM)觀察鹽皮質(zhì)激素受體(MR)蛋白表達及轉(zhuǎn)位,熒光顯微鏡和酶標儀檢測細胞內(nèi)ROS水平。
結(jié)果:(1)與NG組對比,HG組和M組誘導人系膜細胞CYP11B2mRNA及蛋白分別為NG組的3.45倍、2.09倍和3.14倍、2.06倍,HG組和M組細胞上清液醛固酮含量分別為NG組的2.01倍、1.81倍(P值均<0.05),
4、HG組和M組均可促進MR蛋白發(fā)生核轉(zhuǎn)位,定量分析示HG組和M組胞漿/胞核熒光強度較正糖組分別降低30%、21%(P值均<0.05)。(2)HG組和M組oncofetal FN mRNA、ROS表達增加,分別為NG組的2.23倍、1.99倍和2.16倍、1.90倍(P值均<0.05),MY組ROS、oneofetal FN mRNA表達較M組顯著下調(diào),分別較M組降低35%、51%(P值均<0.05)。
結(jié)論:HMCs存在高糖記憶
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