[Gly14]-Humanin在高糖誘導內(nèi)皮細胞損傷中的保護作用.pdf

1、目的：
　　研究[Gly14]-Humanin（HNG）在高糖（Highglucose,HG）誘導的人臍靜脈內(nèi)皮細胞（Humanumbilicalveinendothelialcell,HUVEC）凋亡中的作用，并初步探討其相關機制。
　　方法：
　　第一部分：以人臍靜脈內(nèi)皮細胞為研究對象，通過高糖作用建立細胞凋亡模型。采用MTT法檢測不同濃度HG作用72h后細胞活力的改變，及預處理HNG1μM后對細胞活力的影響；we

2、sternblot法測定Bax、bcl-2、PARP的表達水平；Hoechst33342染色觀察細胞DNA染色質(zhì)形態(tài)變化。第二部分：采用DCFH-DA標記法檢測細胞內(nèi)ROS的改變。
　　結果：
　　第一部分：MTT法檢測結果顯示，與對照組相比，HG50mM刺激HUVEC72h后細胞活力明顯下降（P<0.01），與單獨HG50mM組相比，1μMHNG預處理組細胞活力明顯增高（P<0.05）。Hoechst33342染色熒光顯微

3、鏡觀察結果顯示，與對照組相比，HG50mM組細胞核染色增強，細胞核變形明顯，凋亡細胞數(shù)量增加（P<0.001），與單獨HG50mM組相比，1μMHNG預處理組細胞核染色較弱，細胞核變形不明顯，凋亡細胞數(shù)量減少（P<0.05）。同樣，westernblot結果顯示，與對照組相比，HG組細胞促凋亡基因Bax表達顯著增加，抑制凋亡基因bcl-2表達顯著減少，其比值Bax/bcl-2增加（P<0.05），剪切的DNA修復酶（polyADP-ri

4、bosepolymerase,PARP）增加（P<0.01）；與單獨HG50mM組相比，1μMHNG預處理組Bax/bcl-2減小（P<0.05），剪切的PARP減少（P<0.05）。第二部分：采用DCFH-DA標記法檢測細胞內(nèi)ROS含量。結果顯示，與對照組相比，HG50mM組細胞內(nèi)ROS含量顯著增多（P<0.01）；與單獨HG50mM組相比，1μMHNG預處理組細胞內(nèi)ROS含量減少（P<0.05）。
　　結論：
　　HNG