福建色素紅曲去桔霉素毒素的菌種改造.pdf

1、以福建色素紅曲MQ-01為出發(fā)菌株,采用改良的CTAB法提取其基因組DNA。根據(jù)Genebank公布的Monascus purpureus合成桔霉素的關(guān)鍵酶編碼基因的DNA序列為基礎(chǔ),設(shè)計(jì)引物,并以紅曲菌株MQ-01基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增出合成桔霉素的關(guān)鍵酶的編碼基因。將合成桔霉素關(guān)鍵酶的編碼基因的DNA插入到質(zhì)粒pBluescript sk(+)中,轉(zhuǎn)化到E.coli DH5α中,并對(duì)轉(zhuǎn)化子DNA測(cè)序。結(jié)果顯示,此DNA序

2、列正是合成桔霉素關(guān)鍵酶的編碼基因DNA序列。將已構(gòu)建的載體通過酶切,與pCSN43的trpC基因啟動(dòng)子和Hygromycin B(潮霉素B)抗性基因hph序列連接,并轉(zhuǎn)化到JM109中。制備紅曲菌株MQ-01的原生質(zhì)體,然后通過限制性內(nèi)切酶介導(dǎo)轉(zhuǎn)化,通過潮霉素B抗性篩選出轉(zhuǎn)化子,得到改造菌株MN-02。
　　 為了比較原始菌株MQ-01和改造菌株MN-02的產(chǎn)色素水平和桔霉素含量,本試驗(yàn)采用固體培養(yǎng)和液體發(fā)酵兩種方法進(jìn)行培養(yǎng)后,

3、檢測(cè)其產(chǎn)色素水平和桔霉素含量。結(jié)果顯示:與原始菌株MQ-01的相比,改造菌株MN-02采用兩種不同的方法培養(yǎng),其產(chǎn)紅曲色素色價(jià)水平?jīng)]有降低,還略有提高。固體發(fā)酵色價(jià)提高了30.5 U/g,提高率4.05％,液體發(fā)酵色價(jià)提高率17.85 U/g,提高了10.53％。原始菌株MQ-01固態(tài)培養(yǎng)桔霉素含量為32.875μg/g,液態(tài)發(fā)酵桔霉素含量為20.25μg/ml;而改造菌株MN-02采用兩種不同的培養(yǎng)方法,在本試驗(yàn)的條件下桔霉素均未檢出