建立IAC-HPLC檢測(cè)紅曲米中的桔霉素.pdf

1、桔霉素(Citrinin，CIT)是由青霉屬、曲霉屬和紅曲霉的某些菌株產(chǎn)生的一種廣泛污染玉米、大米、小麥等農(nóng)作物的真菌毒素，在紅曲米中的污染尤為普遍，對(duì)動(dòng)物及人類具有腎毒性、致畸性、致癌性等。目前檢測(cè) CIT 的主要方法有薄層層析法、高效液相色譜法、酶聯(lián)免疫吸附檢測(cè)法等。 本研究建立了免疫親和柱聯(lián)高效液相色譜法 (Immunoaffinity column-High Performance Liquid Chromatograp

2、hy，IAC-HPLC)檢測(cè)紅曲米中的 CIT；并用此方法檢測(cè)了 41 份市售及實(shí)驗(yàn)室自制的紅曲米樣品中的 CIT 含量。主要研究?jī)?nèi)容和結(jié)果如下： 1. 抗CIT單克隆抗體免疫親和柱的制備將純化好的抗 CIT單克隆抗體與溴化氰 (CNBr) 活化的瓊脂糖凝膠(Sepharose) 4FF偶聯(lián)。采用紫外掃描鑒定偶聯(lián)反應(yīng)，間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法及 HPLC 方法檢測(cè)制備好的免疫親和柱的柱容量。每根抗 CIT 單克隆抗體免疫親和柱，用

3、0.5mL活化膠，0.50mg抗CIT單克隆抗體，柱容量為0.35μg。 2. 建立了分析紅曲米中 CIT IAC-HPLC該方法線性范圍 100μg/kg～600μg/kg，信噪比為3:1時(shí)，最低檢測(cè)限為 100μg/kg，超過(guò)日本的限量標(biāo)準(zhǔn)(200 μg/kg)；紅曲米樣品添加 CIT 標(biāo)準(zhǔn)品 (100μg/kg～600μg/kg)，用70％甲醇水溶液提取樣品中 CIT，經(jīng)免疫親和柱凈化、0.01 mol/L 的PBS淋洗、