重組大腸桿菌生產(chǎn)腫瘤血管生長抑制因子kringle5發(fā)酵條件的優(yōu)化及純化.pdf

1、本研究論文通過對重組大腸桿菌生產(chǎn)腫瘤血管生長抑制因子kringle5發(fā)酵工藝和純化工藝的優(yōu)化，進(jìn)一步提高kringle5蛋白的表達(dá)量，尋找一種簡單、快速、分離效果好的純化工藝。首先，在構(gòu)建融合型腫瘤血管生長抑制因子kringle5原核表達(dá)系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，通過改變培養(yǎng)基中氮源的種類和含量、無機(jī)鹽的種類和含量以及碳氮比，確定了最合適的培養(yǎng)基為(g/L)：酵母提取物10，NH4Cl1.33，NaH2PO42，Na2HPO45，MgSO4·7H2

2、O1，葡萄糖6。采用優(yōu)化后的培養(yǎng)基，通過正交實(shí)驗(yàn)，對重組菌的發(fā)酵工藝進(jìn)行了優(yōu)化，優(yōu)化后的重組菌發(fā)酵條件為：溫度35℃，pH7.0，接種量8％，搖床轉(zhuǎn)速260r/min，誘導(dǎo)劑濃度0.8mmol/L，誘導(dǎo)時(shí)機(jī)OD6000.6，誘導(dǎo)時(shí)間6h。搖瓶發(fā)酵的七個(gè)因素中，溶液中誘導(dǎo)劑的濃度是最顯著的影響因素，誘導(dǎo)時(shí)間、誘導(dǎo)時(shí)機(jī)、溫度、pH、搖床轉(zhuǎn)速的影響次之，而接種量的影響不顯著。通過發(fā)酵罐中重組菌的分批培養(yǎng)，確定了培養(yǎng)液中的最佳溶氧量為40％。采