基因工程大腸桿菌發(fā)酵生產(chǎn)重組人胰島素的研究.pdf

1、本研究在前期研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對基因工程大腸桿菌(RRhPI/pQE40E.coliM15)生產(chǎn)(His)6-Arg-Arg人胰島素原(RRhPI)的發(fā)酵工藝及其下游純化復(fù)性工藝進(jìn)行了全面優(yōu)化，初步建立了一套高效表達(dá)、分離純化簡便、回收率好的工藝，并進(jìn)一步放大至發(fā)酵罐水平，為工業(yè)生產(chǎn)提供了可行性研究。 采用正交法對培養(yǎng)基組成、培養(yǎng)條件、誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化后，搖瓶培養(yǎng)可收獲濕菌體43±0.17g/L(n=3)，包涵體約14±0.5

2、2g/L(n=3)，表達(dá)水平約為30％，超過現(xiàn)有文獻(xiàn)報道水平，而發(fā)酵時間較先前工藝縮短18-30小時。將搖瓶優(yōu)化出的培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件放大至發(fā)酵罐進(jìn)行單批發(fā)酵，每升培養(yǎng)基可收獲E.coli51..82克(濕重)，包涵體16.23克(濕重)，超過現(xiàn)有文獻(xiàn)報道水平。比較了超聲破碎細(xì)胞和溶菌酶/超聲破碎細(xì)胞兩種方法，并結(jié)合對包含體洗滌方法的優(yōu)化，得到純度較高的包涵體。對包涵體的純化復(fù)性工藝進(jìn)行多方面綜合考察比較，得到簡便高效的純化復(fù)性工藝——二