大腸桿菌高密度發(fā)酵制備重組人金屬硫蛋白-Ⅲ.pdf

1、本文首次對(duì)大腸桿菌生產(chǎn)重組人金屬硫蛋白-Ⅲ(rhMT-Ⅲ)的高密度發(fā)酵工藝進(jìn)行了研究。從發(fā)酵培養(yǎng)基、控制溶氧量、補(bǔ)料方式、誘導(dǎo)方法等方面進(jìn)行了優(yōu)化。最終在5 L發(fā)酵罐中，大腸桿菌濕菌重最高可達(dá)140 g/L，目標(biāo)融合蛋白約占全菌總蛋白的23％以上。對(duì)菌體進(jìn)行分離純化，rhMT-Ⅲ得率約為每升菌液90毫克蛋白，純度80％以上。 論文包括四個(gè)部分： 1．文獻(xiàn)綜述首先對(duì)金屬硫蛋白及金屬硫蛋白-Ⅲ的理化性質(zhì)、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)、生物學(xué)功能

2、等方面的研究進(jìn)行綜述；并概述了大腸桿菌高密度發(fā)酵的基本情況。最后簡(jiǎn)述了金屬硫蛋白的制備方法及本論文的研究目的和意義。 2．重組大腸桿菌搖瓶發(fā)酵工藝的研究用單因素實(shí)驗(yàn)確定培養(yǎng)基主要成分，并對(duì)誘導(dǎo)劑濃度、表達(dá)時(shí)間及誘導(dǎo)方式等對(duì)菌體生長(zhǎng)及目的蛋白表達(dá)的影響進(jìn)行了研究。結(jié)果表明添加IPTG及乳糖復(fù)合誘導(dǎo)的方式是可行的。 3．重組大腸桿菌在5L發(fā)酵罐高密度發(fā)酵工藝的研究以搖瓶發(fā)酵的結(jié)果為基礎(chǔ)，在5 L發(fā)酵罐中，采用平衡DO-sta

3、r法，通過(guò)攪拌、通入富氧、控制補(bǔ)料流加、優(yōu)化誘導(dǎo)時(shí)機(jī)等方法，實(shí)現(xiàn)了大腸桿菌的高密度發(fā)酵。碳源為甘油時(shí)，在菌體生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)中后期加入IPTG誘導(dǎo)，濕菌重最高可達(dá)115 g/L，融合蛋白表達(dá)約占全菌蛋白的23.88％。碳源為葡萄糖時(shí)，在菌體生長(zhǎng)對(duì)數(shù)中期加入IPTG及乳糖復(fù)合誘導(dǎo)的方式，濕菌重最高可達(dá)140g/L，融合蛋白表達(dá)約占全菌蛋白的23.01％。 4．重組人MT-Ⅲ的分離純化及檢測(cè)高密度發(fā)酵所收獲的菌體，經(jīng)超聲破碎、親和層析、凝