Balb-C小鼠金屬硫蛋白-I基因在大腸桿菌中的克隆.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、該文著重進(jìn)行了MT-1基因的克隆.目的基因MT-I已由本組林琳教師成功地克隆了,即從經(jīng)濟(jì)ZnSO<,4>誘導(dǎo)的Balb/C小鼠的肝臟細(xì)胞中提取總RNA,用RT-PCR的方法擴(kuò)增MT-I基因,全長為186bp,克隆到pUC19上,轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH<,5α>,經(jīng)PCR篩選和限制性內(nèi)切酶鑒定,得到陽性菌株,測序與已報道的小鼠MT-IcDNA的基因序列一致.該文在此基礎(chǔ)之上,用基因工程的方法,獲得一套穩(wěn)定的天然狀態(tài)的(而非融合的)金屬硫蛋白-I

2、的大腸菌表達(dá)系統(tǒng),為此作了以下的工作:1、設(shè)計合成一對特異引物,分別帶有NDEI和ECORI的限制性內(nèi)切酶的識別位點,用PCR方法擴(kuò)增MT-ICDNA的基因片段.這樣MT-I基因的兩側(cè)就帶有了NDEI和ECORI的識別位點.2、用限制性內(nèi)切酶NDEI和ECORI酶切MT-ICDNA的PCR產(chǎn)物,將其插入到質(zhì)粒表達(dá)載體pET21a中相應(yīng)的限制性酶切位點,構(gòu)建非融合質(zhì)粒表達(dá)載體pET21a-MT.3、將重組質(zhì)粒pET21a-MT轉(zhuǎn)化入克隆菌

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